IBDV流行强毒HQ株囊毒和细胞适应毒生物学特性比较VP2、VP5基因序列的分析.pdfVIP

584 2010年学术年会 0 IBDV流行强毒HQ株囊毒和细胞适应毒生物学特性 比较与VP2、VP5基因序列分析 杨 霞王泽霖周 欣赵军姚惠霞王川庆 (河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002) 引言／目的 传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起鸡的一种免疫抑制性传染病。主 要感染3月龄以内的青年鸡。基因组编码蛋白中，VP2蛋白既是IBDV的主要结构蛋白，又是病毒的主要 宿主保护性抗原，与病毒中和抗体的诱导与识别、病毒毒力的变异等有关。VP2基因既是IBDV重要的 毒力基因又决定细胞嗜性。对于VP5功能的研究甚少，仅知道它是～种在IBDV感染过程中具有重要作 用的病毒非结构蛋白。本研究主要是通过对1993年法氏囊大暴发时分离的IBDV流行强毒Ho株囊毒及其 细胞适应毒Ho株的细胞适应性、对SPF鸡致病性等进行比较，同时对其VP2、VP5基因序列进行分析， 从而进一步研究IBDv流行强毒Ho株囊毒和细胞适应毒的细胞适应性差异及毒株毒力变化与VP2、VP5 基因变异的关系，从分子水平探讨造成这种变化可能的机理，为我国wlBDV分子流行病学研究及IBD的 有效防制提供参考依据。 材料方法 用常规方法对IBDV流行强毒Ho株囊毒及其细胞适应毒的细胞适应性、致病性等进行比较，同时对 其VP2、VP5基因序列进行分析。 结果 株囊毒对4周龄sPF鸡致死率高达80％，是真正的超强毒，而细胞适应毒致死率已降为0％。对VP2基因 A、256I、294 高变区研究表明，IBDV流行强毒HQ株具备IBDV超强毒株的分子特征，即222I和299S； A—P、256I—V、294I—L和299 其细胞适应毒除222 S—N外，在VP2公认的毒力位点253(Q—H)、 256V、279N、284T、294 子特征；其细胞适应毒VP5基因有12个位点碱基突变并导致9处氨基酸变异，尤其是ORF区第2个碱基由 “T”突变为“C”后，导致细胞适应毒VP5的N端丢失了4个氨基酸，这种突变与现有的疫苗毒完全一 致。本研究提供了超强毒Ho株经培育、驯化后致病性和细胞适应性转变的分子机理，也丰富了IBDV分 子流行病学的理论。 讨论 养特性、鸡胚致病力、SPF鸡致病性比较试验及VP2、VP5序列分析，结果表明，IBDV流行强毒HQ株 是一株有代表性的超强毒株，且与中国香港超经典超强毒HK46、国外(主要是日本和欧洲)vvIBDV有 家禽生产与禽病防治专题．蟋》 585 密切的亲缘关系。经培育而成的细胞适应毒HQ株在致病性上大大减弱，在分子水平上也发生了核苷酸 与氨基酸的变化，出现了致弱毒株的分子特征，但该毒株仍保留有超强毒株的某些特性，抗原性和免疫 原性没有发生根本改变，且对DF．1细胞表现更为敏感，出现病变更快、毒价更高，因而可将它在DF-I 细胞上、生物反应器上大量繁殖，制各法氏囊灭活疫苗，更好为生产服务。 参考文献：(略) T040057 TaqMan荧光定量PCR检测鸡产蛋下降综合征病毒方法的建立 马震原李刚 (中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193) 引言／目的 鸡产蛋下降综合征(Eggdrop 的减蛋综合征病毒引起的造成产蛋鸡产蛋下降及卵壳形成不全等临床症状的一种禽类传染病，李刚等于 1991证实了EDS在我国大陆的存在。目前对EDS的实验室诊断方法主要归为病原学方法，基于抗原抗体 反应的血清学方法，病毒核酸检测方法。本研究建立的1铀Mall荧光定量PCR方法能够更早地检测病原， 可以动态地反映出病原在体内的分布情况，更加快速、灵敏、准确、特异，为减蛋综合征进一步地研究 提供了一定的技术基础。 材料方法 本实验根据GenBank中公布的减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因的高度保守序列，设计了2对特异性 引物和I条TaqMan荧光探针。以构建