白姜花切花HcPIP2基因克隆表达的分析.pdfVIP

园艺学报2011，38(增刊)：2618 http：／／WWW．alas．ac．cn Sinica 26．com ActaHorticulturae E-mail：yuanyixuebao@1 基因的克隆及表达分析 丁岳炼，林燕飞，何生根，李红梅。 (仲恺农业工程学院生命科学学院，广州510225) coronarium 白姜花(HedychiumKoenig)是我国南方地区颇受欢迎的香型切花，但其花序的小 花极易失水凋萎、衰老快，严重影响观赏寿命和商品价值。水孔蛋白(aquaporin)是一类具有高效 运输水分子的膜蛋白，被认为在植物水分代谢中起重要作用。但水孔蛋白在白姜花切花快速失水衰 老过程中的作用尚未见相关研究报道。本研究中采用RT-PCR及RACE技术，从白姜花切花花瓣中 membraneintrinsic 分离得到一个编码质膜类水孔蛋白(plasma protein，PIP)基因，然后分析探讨其 组织特异性表达和对采后水分胁迫的响应特点，主要结果如下。 147 (1)获得一个白姜花水孔蛋白脚基因的eDNA全长序列。该基因全长lbp，开放阅读框 (ORF)长度为849 bp，预测的氨基酸序列含282个氨基酸。该基因编码的氨基酸序列具有MIP家 pudica)、木榄 (Bruguieragymnorhiza)和葡萄(Vitis 系统发育树分析，该基因所编码的氨基酸与拟南芥PIP2类聚为一类，属于PIP2类亚家族基因，命 名为H删(GenBank登录号：JF770437)。 (2)用半定量RT-PCR方法检测白姜花切花(花朵开放度为3级)觑删基因的组织特异性 表达发现该基因在白姜花切花的叶片、苞片、花梗和花瓣中都有不同程度的表达，其中在花梗与苞 片中表达水平最高，花瓣次之，叶片最低。 cm长)，将小花花梗插在无 (3)待花朵完全开放后，用剪刀轻轻取出花苞上的小花(花梗约5 mL)中进行水分胁迫处理，并以小花花梗插在含50mL蒸馏水的三角瓶中作为对 水的三角瓶(50 4-2)℃，湿 照。试验在仲恺农业工程学院生物技术研究所智能化人工气候室进行，设定温度为(25 度为60％4-10％，光照强度为12 h剪取对 lamol·m-2·s．1。分别于水分胁迫处理0、l、2、4、6和8 照和处理的小花花瓣用于HcPIP2基因的表达分析。结果表明，水分胁迫2h内HcPIP2基因的表达 h 量与初始(即0h)无明显差异，而水分胁迫2h后凰删基因的表达水平呈现快速下降，直至8 时几乎检测不到。与此同时，可观察到小花花瓣在水分胁迫4h后出现萎蔫、皱缩等失水症状，而 对照的小花花瓣在8h内无明显变化。这些结果显示水分胁迫可引起HcPIP2基因表达下调，该基因 在白姜花切花水分代谢中的功能尚在进一步研究。 coronarium 关键词：白姜花；Hedychium Koenig；水孔蛋白：基因克隆；表达分析；水分胁迫 中图分类号：S68 文献标识码：A 文章编号：0513．353X(2011)S-2618-01 收稿日期：201l一0r7—30 ‘通信作者(E删m