的应用诱骗寡核苷酸靶向性阻断STAT3信号通路抑制人脑胶质瘤细胞增殖与研究.pdfVIP

25．应用诱骗寡核苷酸靶向性阻断STAT3信号通路抑制 人脑胶质瘤细胞增殖研究 顾金海‘孙涛+ 李新钢8李刚”夏鹤春‘ 王峰‘ (+宁夏医科大学总医院／宁夏医科大学／宁夏颅脑疾病重点实验室银川750004 4山东大学齐鲁医院济南250012) 人脑胶质瘤是中枢神经系统中最为常见的原发性肿瘤，探寻新的具有显著疗效的治疗方法始 终是神经科学界关注的焦点之一。针对转录因子进行干预，关闭影响肿瘤发生发展相关基因群启 闭的“总阀门”，以达到“级联式”或“瀑布式”组合阻断效应的综合基因治疗方法，是目前的 TransducersandActivatorsof 研究热点之一。信号传导子和转录活化子3(STAT3，Signal Transcription 可以明显抑制肿瘤细胞增殖，因此是胶质瘤基因治疗研究中非常有效的分子靶点。 ODN)，是将体外人工合成的、模拟 ohgodeoxynucleotide，decoy 诱骗寡核苷酸技术(decoy 转录因子靶基因启动子顺式元件的序列、与目标元件有高度亲和性的小分子“诱骗”DNA转染 导入肿瘤细胞，使其竞争性地抑制靶基因启动子与转录因子的结合以降低其转录活性的基因治疗 技术，具有效率高、成本低、特异性强、作用广泛、治疗靶标丰富等优点，是肿瘤基因治疗的一 条有效途径，目前已被广泛应用于多项实验和临床研究。 本研究首先应用Western 酸化活化蛋白的表达情况进行了检测，结果表明胶质瘤组织和细胞中广泛存在着STAT3的过高 表达及持续活化，说明STAT3信号传导通路在胶质瘤中具有重要意义。 其次，应用阳离子脂质体介导的转染法将STAT3 ODN转染导入人脑胶质瘤细胞系内， decoy 并利用流式细胞仪和荧光显微镜对FITC标记的STAT3ODN在细胞中的转染效率及定位情 decoy STAT3ODN高效转染导入胶质瘤细胞，相当部分进入细胞核。 decoy 再次，应用荧光素酶报告法检测分析了decoy 异性。结果表明，STAT3 ODN能够抑制报告STAT3基因转录活性的荧光素酶的相对活性， decoy 而且这种抑制效应和其浓度成正比(P0．05)。 ODN对胶 在此基础上，分别应用细胞计数、MTT比色以及[3H]一TdR掺入法对STAT3decoy 质瘤细胞增殖的抑制效应进行了检测。结果表明，STAT3 ODN能明显抑制胶质瘤细胞DNA decoy 的合成，抑制胶质瘤细胞增殖，其抑制率与浓度和时间呈正相关(P0．05)。 本研究还对decoy 入研究。结果表明：①STAT3 decoy ODN能够下调细胞周期和凋亡相关基因 ODN能够诱导胶质瘤细胞凋亡。③STAT3 decoy decoy 的表达水平。 总之，通过本研究表明，应用STAT3 ODN能够下调胶质瘤细胞的细胞周期调控基因 decoy 一66— 和凋亡基因的表达水平，通过阻滞胶质瘤细胞的细胞周期，诱导细胞凋亡，有效抑制人脑胶质瘤 细胞的增殖。应用decoy 种新途径。 26．氨基苷类药物耳毒性机制的研究 于利1王爱梅1汤浩2陈小章3 (1辽宁医学院生理教研室锦州121001 2中国