DNA重组技术课件.ppt

定向基因改造设想 第1节DNA重组技术的基本工具 思考 在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？ 细菌为什么不会因外源DNA的入侵而灭绝？ 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 作为载体没有切割位点将怎样？ 目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 如果载体对受体细胞有害将怎样？ 1. 载体的必要条件 能自我复制，或能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达； 有切割位点 有遗传标记基因 对受体细胞无害、容易分离 比较容易得到 小结 1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 * * 设想一 能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？ 能否让细菌“吐出”蚕丝？ 设想二 能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？ 设想三 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 什么叫基因工程？ 基因工程需要哪些基本工具? 培育抗虫棉需要哪些工具？ 分子手术刀—限制性内切酶 分子缝合针—DNA连接酶 分子运输车—运载体 一、限制性核酸内切酶 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 内切酶切割DNA后形成的末端——黏性末端、平末端是如何形成的？ 什么叫黏性末端？ 什么叫平末端？ 限制酶存在于原核细胞中的作用是什么？为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 二、ＤＮＡ连接酶——“分子缝合针” １.作用：连接磷酸二酯键 限制酶切割后产生两种不同的末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？ E.coliDNA连接酶：连接黏性末端 T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端 ２.DNA连接酶的种类 DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ 连接部位 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 相同点 双链 单链 在两DNA片段之间形 成磷酸二酯键 将单个核苷酸加 到已存在的核酸 片段的3’末端的 羟基上，形成磷 酸二酯键 都能形成磷酸二酯键 二者都由蛋白质构成 三、基因进入受体细胞的载体 —“分子运输车” 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。 常用的分子运输车有哪些？ 基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工具 具备的 条件 结构简单,大小适中 能在宿主细胞中自 我复制并稳定存在 具一个多个限制酶切位点 具标记基因 质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒 A 练习