MYCT1_TV真核表达载体的构建及鉴定_符爽.pdfVIP

网络出版时间：2014-04-30 11:41 网络出版地址：/kcms/doi/10.3969/j.issn.1672-4992.2014.06.11.html ·１２６９· ＭＹＣＴ１－ＴＶ真核表达载体的构建及鉴定 １，２ １ １ 符　爽 ，孙开来 ，富伟能 ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭＹＣＴ１－ＴＶｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ １，２ １ １ ＦｕＳｈｕａｎｇ ，ＳｕｎＫａｉｌａｉ，ＦｕＷｅｉｎｅｎｇ １ ２ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＬｉａｏｎｉｎｇＳｈｅｎｙａｎｇ１１０００１，Ｃｈｉｎａ；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙ， ＳｈｅｎｇｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＬｉａｏｎｉｎｇＳｈｅｎｙａｎｇ１１００２２，Ｃｈｉｎａ． 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔＭＹＣＴ１－ＴＶ（Ｍｙｃｔａｒｇｅｔ１ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｖａｒｉａｎｔ１）ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ ａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＢｅｌ７４０２ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｅｎｔｉｒｅｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｏｆＭＹＣＴ１－ＴＶｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙＲＴ－ＰＣＲｆｒｏｍｎｏｒｍａｌｈｕｍａｎｂｌｏｏｄａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｐＥＧＦＰ－Ｃ１ｐｌａｓｍｉｄ．Ｔｈｅｆｉ ｄｅｌｉｔｙｏｆｔｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓｗａｓｔｈｅｎｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．ＭＹＣＴ１－ＴＶ－ＧＦＰｖｅｃｔｏｒｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＲＴ－ＰＣＲ ａｎｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＢｅｌ７４０２ｃｅｌｌｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓ ｖｅｒｉｆｉｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｎｔｉｒｅｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｏｆＭＹＣＴ１－ＴＶｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｐＥＧＦＰ－Ｃ１ｖｅｃｔｏｒ．Ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＭＹＣＴ１－ＴＶ－ＧＦＰｖｅｃｔｏｒ，ｔｈｅｍＲＮＡｌｅｖｅｌｏｆＭＹＣＴ１－ＴＶｗａｓｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄａｎｄｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＢｅｌ７４０２ｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＡｎｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｏｆＭＹＣＴ１－ＴＶｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｗｈｉｃｈｗｉｌｌｌａｙａｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｆｕｒｔｈｅｒｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎｏｎｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＭＹ ＣＴ１－ＴＶｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ＭＹＣＴ１－ＴＶ；ＭＹＣＴ１；ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ ＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０１４，２２（０６）：１２６９－１２７１ 【摘要】　目的：构建 ＭＹＣＴ１－ＴＶ（Ｍｙｃｔａｒｇｅｔ１ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｖａｒｉａｎｔ１）真核表达载体，鉴定其在肝癌细胞系 Ｂｅｌ７４０２中的表达。方法：以正常人外周血ｃＤＮＡ为模板，ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增该基因的开放阅读框，定向克隆 至ｐＥＧＦＰ－Ｃ１载体后送测序鉴定。将构建好的ＭＹＣＴ１－ＴＶ－ＧＦＰ表达载体瞬时转染 Ｂｅｌ７４０２细胞，ＲＴ－ ＰＣＲ结合荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况并鉴定载体构建是否成功。结果：测序结果证实成功将 ＭＹＣＴ１－ＴＶ的开放阅读框克隆至ｐＥＧＦＰ－Ｃ１表达载体，且转