NtSKP1_GFP植物表达载体的构建及亚细胞定位_张付云.pdf

西北农业学报 　2009 ,18 (4) :144148 A ct a A g ricul t u rae B oreal iocci dent al is S i nica NtSKP1GFP 植物表达载体的构建及亚细胞定位 1 ,2 3 1 1 1 张付云 ,陈士云 ,赵小明 , 白雪芳 ,杜昱光 ( 1. 中国科学院 大连化学物理研究所 ,大连 　116023 ; 2 . 大连水产学院 ,大连 　116023 ; 3 . 中国科学院 武汉病毒研究所 ,武汉 　43007 1 ) 摘 　要 : 用 PCR 技术扩增 N tS K P1 基因的编码区 ,定向克隆至表达载体 p CA MB IA 1302 上构建用于瞬时表 达 N tS K P1 蛋白的重组质粒 。重组质粒经 PCR 和测序鉴定后用冻融法转入农杆菌 LBA4404 ,进而经农杆菌 LBA4404 介导转入烟草悬浮细胞 ,激光共聚焦显微镜观察确定其亚细胞定位 。测序结果表明 ,插入片段与预 期序列完全一致 ,与载体形成了一个完整的基因表达盒 ;亚细胞定位结果表明 N tS K P1 蛋白在胞浆和核部位 均有分布 。 关键词 : N tS K P1 基因 ,植物表达载体 ,亚细胞定位 中图分类号 :Q812 　　　　文献标识码 : A 　　　　　文章编号 (2009) 040 14405 Construction of NtSKP1GFP Plant Expression Vector and Subcell ular Location Z HAN G Fuyun1 , 2 , C H EN Shiyun3 , Z HA O Xiaoming1 , BA I Xuefang1 and DU Yuguang1 ( 1. Dalian In stit ut e of Chemical Phy sics , Chinese Academy of Sciences , Dalian Liaoning 　116023 , China ; 2 . Dalian Fi sheries U niver sit y ,Dalian Liaoning 　116023 ,China ;3 . Wuhan In stit ut e of Virology , Chinese Academy of Sciences , Wuhan Hubei 　43007 1 China) Abstract : To con st ructio n p lant exp re ssion vector of N tS K P 1 , t he op en reading f rame of N tS K P 1 wa s amp lified by PCR , and wa s in sert ed to p la smid p CA MB IA 1302 . DN A sequencing showed t hat t he sequence of t he reco mbinant p la smid wa s cor rect . Then t he reco mbinant p la smid wa s t ran sfer red into A g robacte ri um t um ef aciens st rain LBA4404 t hro