SARSCoV假病毒中和试验技术的建立及评价.pdf

第23．卷第6期 病 毒 学 报 V01．23No．6 2 0 07年11月 CHlNESEJOURNALOFVIROLOGY November2007 SARS-CoV假病毒中和试验技术的建立及评价 闫克夏1，谭文杰1，张相民1，王慧娟‘，李岩2，阮力1 (1．中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，北京100052；2．加拿大国家微生物实验室) 摘要：为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患，建立了基于假病毒系统、操作较安 全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoVs(密码子优化的全长S蛋白，简称S)的真核表 7CMVEGFP)3个质粒载体系统共 达载体(pVRC8304)，与HIV慢病毒包装质粒(pCMVA8．2)及转移质粒(pHR 析，确定SARS假病毒能有效进入细胞，建立了可在BSL-2级实验室操作的SARS病毒中和试验技术平台。用该 技术平台对不同免疫血清进行了中和抗体分析，并比较了基于假病毒和基于SARS活病毒的中和试验效果。结果 显示：SARS假病毒和SARS活病毒两个中和试验系统获得中和抗体滴度变化趋势一致，表明本研究构建的SARS 假病毒可替代SARS活病毒用于建立操作上安全的SARS病毒中和试验技术平台。 关键词：SARS-CoV；S蛋白I假病毒；中和试验 中图分类号：R373．1文献标识码：A 文章编号：i000—8721(2007)06—0440-07 SARS-CoV是引起严重呼吸道窘迫综合征的免疫动物后均可产生中和抗体，并保护动物免受 新病原[1]，迄今已发生过三次人群感染暴发流行[2]。 特异、灵敏、快速和操作制备安全的SARS确诊诊由于操作活毒，需在BSL一3级实验室中进行，这就 限制了传统病毒中和试验在SARS-CoV感染监测、 断试剂及安全有效的SARS疫苗是有效防控SARS 再次出现的重要措施。RT—PCR诊断技术特异、灵检测、诊断、SARS疫苗效果评估及其他SARS相关 敏，但受标本采集时间、采集方法、样本类型和样本 研究中的应用。 量等的影响较大。目前批准使用的EIA等血清学 对于致病性和传染性很强的病毒，操作活毒都 检测的试剂盒灵敏度和特异性也较好，但因需操作 会面临着危险性高、周期长、对实验条件要求苛刻， 活毒而存在严重的生物安全隐患，而且这些检测试 需要在BSL-3级实验室进行等问题。在进行这类 疾病研究时，假病毒技术是一种非常有效的研究手 剂与其他HCoVs间的交叉免疫反应性尚待进一步 阐明[2’3]。SAR孓CoVS蛋白氨基酸序列与其他 段[8一]。与活病毒相比，假病毒具有相似的细胞感 染特点，可以用来模拟真病毒感染细胞的早期过程， HCoV的同源性很低(20％～27％)，且SARS-CoV S蛋白与其他病毒比较有不同的T细胞表位和独特 而且假病毒内携带的报告基因(EGFP、LacZ等)， 可以快速方便地进行各种检测和分析。此外，操作 的抗原性质[4，5]。由此推断，S蛋白和其他HCoVs 假病毒安全性较高，这有助于防止高致病性或高度 发生交叉反应的可能性极低，可能用作SARS抗体 传染性的病毒从实验室泄漏出来。因此，假病毒不 检测的特异性抗原。另外，在SARS病毒感染过程 仅可以用来研究病毒与宿主细胞的关系、克隆病毒 中，准确评价病毒感染后体内中和抗体反应不但对 的受体，更重要的是可以替代传