不同剂量X射线照射对小鼠胸腺脾脏肝脏细胞凋亡及p53基因表达的影响.pdf

第∞卷第6期 辐射防护 v01．27No．6 2007年11月 Radi撕0Il‰don №．2007 不同剂量X射线照射对小鼠胸腺、脾脏、肝脏 细胞凋亡及p53基因表达的影响 李淑萍+ 何津祥李敏“ 杜兰宁 刘兆辰 (兰州大学第一医院放疗科．730000) 摘要采用x射线全身照射小鼠，在普通光镜及流式细胞仪(F℃M)下检测细胞凋亡，用免疫组织化学 方法检测p53蛋白的表达。结果表明，照射剂量在2—8Gy范围内，脾脏、胸腺细胞凋亡率随照射剂量的 增加而升高，细胞周期阻滞于G1期，凋亡率最高在照后8—12小时。肝脏细胞凋亡率最高峰出现在照 后24小时，s期和岛／M期细胞阻滞增多。脾脏、胸腺细胞中p53蛋白表达阳性，肝脏细胞中p53蛋白表 达阴性。 关键词辐射损伤胸腺脾脏肝脏细胞捅亡p53 随着核能事业的不断发展，人们在利用核 机制，进而应用于临床防治，还是利用基因转移 能的同时，受到辐射照射的危险也逐渐增加，辐 技术，选择特异的治疗靶，有针对性地进行抗凋 射引起的损害已日益受到人们的重视。大量文 亡损伤的有效治疗，均具有重要指导意义。本 献报道，辐射可以激活、活化细胞基因表达等， 文采用不同剂量的x射线一次性全身照射小 这些基因上调及下调，可引起细胞的增殖及分 鼠，观察了照后不同时间胸腺、脾脏、肝脏细胞 化、存活及死亡等一系列的生物学改变【loJ。 的凋亡及细胞周期的变化，同时用免疫组织化 细胞凋亡是由基因介导的一种细胞主动自杀的 学方法检测了p53基因的表达，为肿瘤的临床 死亡方式。许多与细胞增殖和癌变有关的原癌 治疗提供基础性的研究资料。 基因和抑癌基因都参与了对细胞凋亡的调控。 抑癌基因是细胞周期的负调控因子，抑癌基因 l材料和方法 p53在凋亡调节通路上起着重要的调控作用， 1．1动物分组及照射方法 该基因可对复杂的DNA系统进行调控。近期 昆明小鼠，雄性，同批鼠龄，10—12周龄， 研究发现，照射后随着凋亡率的增加，免疫组织 体重18—20 g，兰州大学医学实验动物中心提 淋巴细胞p53基因和蛋白在一定照射剂量范围 供。将动物随机分为对照组(16只)和照射组， 内显示出剂量依赖性的增加，表明在辐射诱导 照射组剂量分别为2Gy、5Gy、8Gy(各16只)。 的淋巴细胞凋亡调控中p53基因起着重要的促 采用x射线一次性全身照射小鼠，剂量率为2 进作用。细胞凋亡作为一种生命现象，与细胞 Gy／-nin。照射后各组小鼠进行无菌饲养(房间 生长和增殖一样，将会受到更广泛的关注。因 用1：5000浓度的高锰酸钾喷洒消毒。空气用紫 而，随着细胞凋亡及其调控机制研究的不断深 外线灯照射30m-m，2次／日，饲料、水及垫料均 入，无论对于揭示免疫损伤和某些肿瘤的发生 经高压灭菌)。 ·第一作者简介：李斑萍，女，1971年1月出生，1995年毕业于兰州大学医学院临床医学系，2006年获兰州大学医学院肿瘤病 理专业硬士学位，主治医师。 ¨兰州大学基础医学院。 ·350· 辐射防护 第27卷第6期 1．2细胞形态观察及凋亡细胞计数 p53蛋白。该试剂盒采用sABc标准工程程序， 分别于照射后4h、8h、12h、24h各取小 用DAB显色，光镜下观察，细胞核出现褐黄色 鼠4只脱颈椎处死，无菌取出小鼠胸腺、脾脏、 的为阳性细胞。 肝脏组织，用10％福尔马林固定，石蜡包埋，组 1．5统计学处理 织切片，HE染色，油镜下(×1000)观察细胞形所有实验数据用s