不同转染方法转染牛体细胞效率的比较.pdf

农业生物技术学报，2011 年，第19 卷，第6 期，第1027~1033 页 Journal of Agricultural Biotechnology, 2011, Vol.19, No.6, 1027~1033 研究报告 A Letter 不同转染方法转染牛体细胞效率的比较 * * 李松 丁方荣 戴蕴平 朱士恩 中国农业大学动物科技学院，中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京济普霖生物技术有限公司，北京100193 * 通讯作者，daiyunping@ ；zhushien@ 摘 要 为了从新转染方法与传统转染方法的比较中找出更为高效的转染方法，本研究以绿色荧光蛋白 (GFP）质粒DNA 为外源基因，分别采用核转染法、电穿孔法和脂质体法转染牛的3 种常用核移植供体细胞 (胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、卵丘颗粒细胞) 。针对不同类型的细胞，实验首先对核转染法和电穿 孔法的转染参数进行了系统的摸索和优化，然后将优化后的核转染法、电穿孔法与脂质体法在可控实验条件 完全一致的情况下进行了转染对比实验，分析比较了转染48 h 后的绿色荧光比率和细胞存活率。结果显示， 核转染法转染胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞和卵丘颗粒细胞的优化程序分别是V013 、T023 和 U023 ；在电穿孔法中，当电场强度为90 V/mm ，脉冲时间为10 ms 时，胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞的转 染效率最高，胎儿输卵管上皮细胞则在电场强度为80 V/mm，脉冲时间为5 ms 时获得了最佳转染效率；最后 通过转染对比实验得出，核转染法在3 种细胞中都获得了最高的转染效率，分别为(98.78±0.30)% 、(88.43± 2.10)%和(71.31±0.77)% ，均显著高于电穿孔法和脂质体法；转染后的存活率则为脂质体法最高，电穿孔法最 低。研究结果说明，核转染法可以成为一种结合牛体细胞克隆技术生产转基因牛更有效的转染方法。 关键词 细胞转染，核转染法，电穿孔法，脂质体法，牛体细胞 Comparison of Different Methods for Transfection Efficiency of Bovine Somatic Cells Li Song Ding Fangrong Dai Yunping* Zhu Shien* Animal Sci-tech College, State Key Laboratory for Agrobiotechnology, China Agricultural University, Geneprint Biotechnology Co.LTD, Beijing 100193, China * Corresponding author, daiyunping@; zhushien@ DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.06.007 Abstact The objective of this study was to find a more efficient transfection method between a new transfection method and the traditional transfection methods. Three types of bovine donor cells (fetal fibroblast cells, fetal oviduct epithelial cells and cumulus granulosa cells) that commonly used for nuclear transfer were transfected with plasmid DNA of green fluorescent protein (GFP) gene using the nucleofection, electroporation and lipofection. We firstly determined optimal transfection parameters for nucleofection and electroporation, then transfection experiments were carried out to compare efficiency of optimized nucleofection