中国红豆杉细胞色素P450还原酶的基因克隆表达与活性分析.pdf

HEREDITAS (Beijing) 2010 11 , 32(11): 1187 ―1194 ISSN 0253-9772 研究报告 DOI: 10.3724/SP.J.1005.2010.01187 中国红豆杉细胞色素P450 还原酶的基因克隆、表达与 活性分析 1, 2 1 1 1 1 1 2 1 阮仁余 , 孔建强 , 郑晓东 , 张书香 , 秦咸蕴 , 程克棣 , 王建明 , 王伟 1. , , , 100050; 2. , 150040 细胞色素P450 还原酶(Cytochrome P450 reductase, CPR)是细胞色素P450 羟基化酶电子传递链的组成部 分, 在生物体内起着重要的电子传递作用。文章从中国红豆杉(Taxus wallichiana var. Chinensis)愈伤组织细胞中 克隆CPR 基因(TchCPR), TchCPR 含有一个2 154 bp 碱基的阅读框, 编码717 个氨基酸残基; 在氨基酸水平上它 与裸子植物细胞色素 P450 还原酶的同源性(82%)高于其他被子植物的细胞色素 P450 还原酶(74%) 。在大肠 杆菌BL21(DE3) 中诱导表达了全长和从N- 端截短不同数目氨基酸残基的6 个融合肽段, 经亲和层析纯化, 分析 了表达的不同长度融合蛋白的电子传递效率。结果表明截短长度大于61 个氨基酸残基肽段的胞色素P450 还原 酶都能够诱导表达, 在表达水平上无显著差异, 而截短 61 个氨基酸的 CPR 融合蛋白电子传递的催化活性 (1.6057 nmol Cyt Cred/min/g TchCPR 融合蛋白)高于其他4 个融合蛋白。 中国红豆杉; 细胞色素P450 还原酶; 诱导表达 cDNA cloning, heterologous overexpression and activity analysis of cytochrome P450 reductase of Taxus Chinensis 1, 2 1 1 1 RUAN Ren-Yu , KONG Jian-Qiang , ZHENG Xiao-Dong , ZHANG Shu-Xiang , 1 1 2 1 QIN Xian-Yun , CHENG Ke-Di , WANG Jian-Ming , WANG Wei 1. Key Laboratory of Biosynthesis of Natural Products, Ministry of Health of PRC, Key Laboratory of Bioactive Substances and Resources Utilization of Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education of PRC, Institute of Materia Medica, chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College, Beijing 100050, China; 2. Academy of Traditional Chinese Medicine, Heilongjiang University of Chi