人视网膜色素上皮细胞特异性吞噬过程中MERTK基因表达的变化.pdf

人视网膜色素上皮细胞特异性吞噬过程中MERTK 基 因表达的变化 孙昱昭，洪晶 中国医科大学附属一院眼科，沈阳 （110001 ） E-mail ：hongjing64@ 摘 要：目的通过检测人视网膜色素上皮细胞（human retinal pigment epithelium ， hRPE ） 吞噬视细胞外节（rod outer segment ，ROS ）过程中MERTK 基因表达的变化，明确MERTK 7 基因在hRPE 的吞噬功能中所起的作用。方法 用1×10 个/ml ROS 于37℃孵育体外培养的 正常hRPE 细胞，在孵育的不同时间终止吞噬反应。用双重荧光标记法检测hRPE 细胞吞噬 动力学。用RT-PCR 方法检测MERTK 基因 mRNA 水平的变化。结果 hRPE 细胞与ROS 孵 育过程中，ROS 结合于hRPE 细胞表面发生在15 min 时，hRPE 细胞吞噬ROS 在24h 时达 到饱和。MERTK 基因在hRPE 细胞与ROS 短时（5min-90min ）及长时（3h-24h ）孵育过程 中均呈现出高表达的状态。结论MERTK 基因的高表达对HRPE 吞噬ROS 过程的维持致关 重要。MERTK 基因作为上游调控信号参与hRPE 细胞吞噬功能的调节。 关键词: 视网膜色素上皮细胞；吞噬；MERTK 基因 0 前言 随着人类基因组的逐渐破译，许多疾病的致病基因不断被发现。眼科疾病的基因研究也 取得了重大进展，发现了 40 余个与视网膜色素变性相关的致病基因，并有 26 个基因被定位、 克隆。其中与常染色体显性遗传性视网膜色素变性相关的基因有 RHO ，RDS ，RP1 等 8 个， 与常染色体隐性遗传性视网膜色素变性相关的基因有 RPE65 ，ABCR ，CRB1，USH2A 等， 与性连锁遗传性视网膜色素变性相关的基因有 RP2 ，RP3 ，而 ROM1 和 RDS 基因则与双基 （ ， ） 1 2 因视网膜色素变性相关 。 同时，在以RCS 鼠为研究对象的实验研究中， DCruz 等惊喜地发现了引起研究 RCS 鼠吞噬缺陷的原因在于 Mertk 基因的 DNA 缺失导致密码 20 后翻译信号终止、错误转录出 （ ） 一个异常无功能的 Mertk 蛋白 3 。这一发现使得 RPE 吞噬机理的研究进入了一个新的阶段。 （ ） 相继地，与鼠 Mertk 基因同源的人类 MERTK 基因已被定位到 2q14.1 4 ，并且已有MERTK （ ） 5 突变致常染色体隐性遗传性视网膜色素变性病例的报道 。 这些可喜的发现强调了 Mertk 基因在 RPE 吞噬过程中的关键作用，同时也为 RPE 吞噬 功能机制的进一步研究提出了新的问题——吞噬过程中 Mertk 基因的表达如何？Mertk 基因 的表达对吞噬功能如何调节？为此，本实验以离体培养的HRPE 细胞为研究对象，检测HRPE 细胞特异性吞噬过程不同阶段 MERTK 基因 mRNA 表达的动态变化，探讨 MERTK 基因表 达与特异性吞噬的相互关系，为明确 MERTK 的调控机制奠定基础。 1. 材料和方法 1.1 材料 取自中国医科大学附属第一医院眼科角膜移植术后的正常供体眼（供体无眼部及全身疾 病），眼球供体年龄为24～38 岁。 1.2 试剂与仪器 DMEM 培养液（美国 Gi