刚地弓形虫细胞培养上清对人结肠癌细胞SW480增殖与凋亡的影响.pdf

2O1O，26 (3) 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJournalofZoonoses 229 文章编号 ：1002—2694(2010)03—0229—06 刚地 弓形虫细胞培养上清对人 结肠癌细胞 sw480增殖与凋亡的影响 高 剑 ，叶 彬 “。，武卫华 摘 要 ：目的 观察刚地 弓形虫RH株速殖子与人结肠癌 sw480细胞系共培养上清对人结肠癌 sw480细胞增殖 的影响 和诱导其凋亡与坏死的情况。方法 取对数生长期的人结肠癌 sw480细胞 (1×10)，建立 弓形虫RH株速殖子数 日分别为 2 ×1o、4×lOs、8×1O、16×1O的共培养模型，观察 弓形虫速殖子在 sw480细胞 中的寄生，提取共 同孵育 72h后的培养上清 ， 以新鲜培养基稀释为半量 ，体外作用人结肠癌 sw480细胞 12h、24h、48h、72h，CKK一8法检测吸光度(A450值)并计算抑制率 ； Anne I卜、卜F1TC／PI染色细胞后上流式细胞仪检测细胞凋亡与坏死率；琼脂糖凝胶 电泳观察细胞凋亡 DNA条带；透射 电镜和 荧光显微镜观察细胞形态学改变。结果 弓形虫RH株速殖子可在人结肠癌 sw480细胞 内寄生和增殖 。CKK一8法检测结果 显示上述共培养上清对 sw480细胞增殖抑制率随上清作用时间延长均 明显增大，48h最大抑制率达 44．55 。流式细胞仪检 测显示实验组 sw480细胞早期凋亡率和 晚期凋亡与坏死率随上清作用 时间延长均 明显增加 ，48h早期凋亡 率达最高值 (11．54 )，48h以后早期凋亡率下降，晚期凋亡和坏死率显著上升，72h总死亡率可达46．11 ，细胞杀伤效果 明显；琼脂糖凝 胶 电泳显示典型的DNA云梯状条带；荧光显微镜和透射 电镜观察到细胞凋亡和坏死典型形态。结论 弓形虫 RH株速殖子 与人结肠癌 sw480细胞共培养上清对体外培养 的sw480细胞增殖有明显的抑制作用，并可诱导 sw480细胞凋亡与坏死 。 关键词 ：弓形虫；人结肠癌细胞 sw480；培养 ；细胞凋亡 。 中图分类号：R378．5 文献标识码 ： A Inhibitionofproliferationandapoptosisofhuman colon cancer cellsw480celllineinducedby theco-culture supernatantofToxoplasmagondii GAo Jian，YEBin，WU W ei-hua (DepartmentofPathobiology，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China) ABSTRACT ：Toinvestigatetheinhibitiveeffectoftheco-culturesupernatantofToxoplasmagondiiontheproliferationof humancoloncancercelllinesw480and／oritsinducedapoptosisandnecrosisinvitro，theco-culturemodelofsw480cells (1x106)wasestablishedwithdifferentnumberofToxoplasmagondii(theconcentrationoftachyzoiteswas2×10 ，4×10 ，8 × 1O ，16×10 respectively)，andtheco-culturesupernatantsweregathered72hourslater．Thesw480cellsweretreatedfor differenthourswithdifferentmodelsoftheco-culturesupernatant．Theparasitism andproliferationofToxoplasmago