利用Gateway技术构建重组腺病毒pAd_NK4.pdf

·462 · 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 Apr; 27 ( 4) : 462 ～ 6 利用 Gateway 技术构建重组腺病毒 pAd-NK4 ， 阙文忠 陈君敏 ( ， 350005) 福建 医科大学附属第一 医院血液风湿科 福建 福州 doi: 10 ． 3969 /j ． issn． 1001 － 1978． 2011． 04 ． 006 447 ， N 链 的含 个氨基酸的片段 包括 末端 的发夹结 文献标识码: A 文章编号: 1001 － 1978( 2011) 04 － 0462 － 06 4 kringle ， 1 434 bp 。 构和 个 结构 编码序列长度 研 中国图书分类号: R34 1; R373． 1; R394-3 NK4 HGF c-Met ， 究表 明 能和 竞争性结合 蛋 白 使后 摘要: 目的 利用 Gateway 技术构建 含 人 肝 细胞生长 因子 ， HGF 者无法发生磷酸化 从而抑制 所诱导 的肿瘤生 ( HGF) NK4 基 因的重组腺病毒载体 。方法 以含有 HGF / 、 ， 长 浸 润 及 血 管 生 成 活 性 是 第 一 个 能 全 面 拮 抗 NK4 PCR NK4 ， NK4 基 因的质粒为模板 扩增 基 因 将 回收的 ［9 － 10］ HGF 活性的生物分子 。 PCR 产物片段 克隆至腺病毒 穿梭 载体 pYr-adshuttle-6 获得 由 Invitrogen 公 司开发 的 Gateway 技术是一种 pYr-adshuttle-6-NK4 。 ， LR 重组质 粒 从该 重组质 粒 上 利用 ， 通用型克隆方法 其基于 λ 噬菌体位点特异性重组 同源重组将 NK4-IRES-EGPF 表达框转移至腺病毒骨架质粒 ［11 － 12］ ， ， pAD / BL-DEST ， pAd-NK4-IRES-EGFP