乙肝病毒表面抗体测定操作规程007.docVIP

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乙肝病毒表面抗体测定操作规程007.doc

乙型肝炎病毒表面抗体测定 五环医院检验科 操作规程文件号:WH-MY-007 版本:第1版 共3 页 2009年3月1日起实施 本规程每2年复审一次 复审日期:2009年2月27日 复审人:雷凤珠 规程编写者:王莉红 审批者:王金成 批准日期:2009年2月28日 检验科主任:雷凤珠 1、检验目的:乙肝表面抗体测定 2、检测原理:本试剂在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗原(HbsAg), 配以酶标抗体(HBsAg-HRP)及TMB显色剂等其他试剂,采用双抗体夹心法原理检测人血清(或血浆)中的乙肝表面抗体(HBsAb). 3、 试剂和仪器: 3.1试剂:上海科华生物技术有限公司 3.2试剂盒组成: 1、HBsA.酶标板 4×12孔 7、显色剂B液 3 ml×1瓶 2 、HBsA0.5ml×1管 8、终止液 3 ml×1瓶 3、HBsAb)阴性对照. 0.5ml×1管 9、自封袋 1个 4、HBsAb酶标试剂 3ml×1瓶 10、封板膜 1张 5、浓缩洗涤液 20 ml×1瓶 11、说明书 6、显色剂A液 3 ml×1瓶 3.3试剂稳定性:原装试剂在2-8℃避光保存,有效期6个月。 3.4仪器: 3.4.1 TE-B型定时微量振荡器(江苏泰县) 3.4.2 37℃水浴箱(上海山连) 4、标本: 4.1静脉抽取空腹患者标本3.0ml(真空采血管),将血液放置在37℃水浴箱中30分钟后,分离血清。 4.2样品后收到后不要急于分离血清,以免血块收缩不良造成结果假阳性。 4.3溶血标本不能用于检测,因溶血可造成假阳性结果出现。 4.4用完的标本,应在样品管上注明日期,放置在2-8℃冰箱中保存一周。 4.5样品放置一周后,逐管加入1:50的84消毒液,并放置4小时后,装入医疗垃圾袋 由专人按医疗垃圾处理。 5、操作 5.1操作步骤: 5.1.1配液:将20ml浓缩洗涤液(20×)用蒸馏水或去离子水稀释至400ml备用。 5.1.2编号:将样品对应微孔按序号编号,每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1 孔 (空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步相同), 5.1. 3加样:分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照50ul。 5.1.4加酶:每孔加入酶标试剂1滴(50ul),轻轻振荡混匀。 5.1.5温育:用封板模封板后置37℃温育30分钟。 5.1.6洗涤:将孔内液体用吸引器吸干,用洗涤液洗涤5遍,用吸引器吸干。 5.1.7显色:每孔加入显色剂A、B液各1滴(50ul), 轻轻振荡混匀, 37℃避光显色 10分钟。 6、结果判定: 6.1目测:在白色背景下观察各孔显色情况,有明显蓝色者为HBsAb阳性;无色者为HbsAb 阴性。 6.2酶标仪检测:每孔加入终止液1滴,轻拍混匀,用酶标仪(450nm波长)测定各孔OD 值。 6.4阳性判定:样品OD值≥临界值(CUTOFF)者判为阳性。 6.5阴性判定:样品OD值≤临界值(CUTOFF)者判为阴性。 7、注意事项: 7.1试剂盒从冷藏环境中取出时应室温平衡15-30分钟后方可使用,未用完的微孔条用 自封袋密封保存, 7.2酶标板洗涤时各孔需加满洗液,防止孔口内有游离酶不能洗干净。应设定30-60秒 的洗液浸泡时间。 7.3滴加试剂前应将滴瓶翻转数次,使液体混匀,并弃去1-2滴。滴加时瓶身应保持垂 直,以保持滴量准确(注意:勿将试剂滴在孔壁上)。 7.4所有样品和废弃物都应按传染源处理。终止液为2M硫酸,使用时应注意安全。 7.5操作应按说明书严格进行,不同批次试剂不得混用。 8、室内质控: 8.1 试剂厂家提供的阴性和阳性对照品。 8.2每次试验做室内质控。测定过程是:每次测定均需做阴性和阳性对照,对照结果良好方可发出病人报告。对于1、3、5阳性或1、4、5阳性的标本必须复查1次,结果与第一次相同,方可发出报告。如果不同,重新采集病人样本进行检测或查DNA定量。 9、室间质评: 11.1全国临床检验操作规程(第二版)中华人民共和国卫生部医政司 11.2原试剂说明书 1五环医院操作规程 WH--MY-007

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