乙肝病毒e抗原测定操作规程006.docVIP

乙型肝炎病毒e抗原测定 五环医院检验科 操作规程文件号：WH-MY-006 版本：第 1版 共3 页 2009年3月1日起实施 本规程每2年复审一次 复审日期：2009年2月27日 复审人：雷凤珠 规程编写者：王莉红 审批者：王金成 批准日期：2009年2月28日 检验科主任：雷凤珠 1、检验目的：乙肝e抗原测定 2、检测原理：本试剂在微孔条上预包被纯化乙肝e抗体(HBeAb)，配以酶标抗体（HBeAb-HRP）及TMB显色剂等其他试剂，采用双抗体夹心法法原理检测人血清(或血浆)中的乙肝e抗原（HBeAg）. 3、 试剂和仪器： 3.1试剂：上海科华生物技术有限公司 3.2试剂盒组成： 1、HBeAg.酶标板 4×12孔 7、显色剂B液 3 ml×1瓶 2、HBAg）阳性对照. 0.5ml×1管 8、终止液 3 ml×1瓶 3、HBeAg）阴性对照. 0.5ml×1管 9、自封袋 1个 4、HBeAg酶标试剂 3ml×1瓶 10、封板膜 1张 5、浓缩洗涤液 20 ml×1瓶 11、说明书 6、显色剂A液 3 ml×1瓶 3.3试剂稳定性：原装试剂在2－8℃避光保存，有效期6个月。 3.4仪器： 3.4.1 TE-B型定时微量振荡器 3.4.2 37℃水浴箱（上海山连） 4、标本： 4.1静脉抽取空腹患者标本3.0ml(真空采血管)，将血液放置在37℃水浴箱中30分钟后，分离血清。 4.2样品后收到后不要急于分离血清，以免血块收缩不良造成结果假阳性。 4.3溶血标本不能用于检测，因溶血可造成假阳性结果出现。 4.4用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2－8℃冰箱中保存一周。 4.5样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾袋 由专人按医疗垃圾处理。 5、操作 5.1操作步骤： 5.1.1配液：将20ml浓缩洗涤液（20×）用蒸馏水或去离子水稀释至400ml备用。 5.1.2编号:将样品对应微孔按序号编号,每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1 孔 （空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同）。 5. 1.3加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照50ul。 5.1.4加酶：每孔加入酶标试剂1滴（50ul）,轻轻振荡混匀。 5.1.5温育：用封板模封板后置37℃温育30分钟。 5.1.6洗涤：将孔内液体用吸引器吸干，用洗涤液洗涤5遍，用吸引器吸干。 5.1.7显色：每孔加入显色剂A、B液各1滴（50ul）, 轻轻振荡混匀, 37℃避光显色10 分钟。 6、结果判定： 6.1目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显蓝色者为HBeAg阳性；无色者为HbeAg 阴性。 6.2酶标仪检测：每孔加入终止液1滴,轻拍混匀，用酶标仪(450nm波长)测定各孔OD值。 6.3临界值：（CUTOFF）计算：临界值＝阴性对照孔OD值×2.1。（阴性对照孔OD值低于 0.05者按0.05计算） 6.4阳性判定：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者判为阳性。 6.5阴性判定：样品OD值≤临界值（CUTOFF）者判为阴性。 7、注意事项： 7.1试剂盒从冷藏环境中取出时应室温平衡15－30分钟后方可使用，未用完的微孔条用 自封袋密封保存， 7.2酶标板洗涤时各孔需加满洗液，防止孔口内有游离酶不能洗干净。应设定30－60秒 的洗液浸泡时间。 7.3滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体混匀，并弃去1－2滴。滴加时瓶身应保持垂 直，以保持滴量准确（注意：勿将试剂滴在孔壁上）。 7.4所有样品和废弃物都应按传染源处理。终止液为2M硫酸，使用时应注意安全。 7.5操作应按说明书严格进行，不同批次试剂不得混用。 8、室内质控: 8.1 试剂厂家提供的阴性和阳性对照品。 8.2每次试验做室内质控。测定过程是：每次测定均需做阴性和阳性对照，对照结果良好方可发出病人报告。对于1、3、5阳性或1、4、5阳性的标本必须复查1次，结果与第一次相同，方可发出报告。如果不同，重新采集病人样本进行检测或查DNA定量。 9、室间质评: 11、参考文献： 11.1全国临床检验操作规程（第二版）中华人民共和国卫生部医政司 11.2原试剂说明书 1、 操作规程 WH--MY-006