RNA干扰沉默胃癌HDAC1基因表达的实验的研究.pdf

RNA 干扰沉默胃癌HDAC1 基因表达的实验研究 申 请 者：庄 涵 虚 导 师：王 小 众 教授 马 旭 东 教授 中文摘要 【目的】 研究组蛋白去乙酰化酶（HDAC1）、组蛋白H3、H4 乙酰化在胃癌患者 异常表达及其意义，寻找胃癌分子治疗的新标靶；设计针对HDAC1 基因的小干扰 RNA 片段，观察HDAC1 小干扰RNA 对人类胃癌MGC803 细胞增殖、凋亡的影响；探 讨HDAC1 小干扰RNA 对MGC803 细胞组蛋白甲基化、乙酰化的影响。 【方法】 1、免疫组织化学方法检测HDAC1、组蛋白H3、H4 乙酰化在胃癌、慢 性浅表性胃炎，萎缩性胃炎、中重度不典型增生病理组织中的表达，统计学分析 探讨其临床意义。 2、设计针对HDAC1 基因4 个小干扰RNA 片段，经Lipofectamine 2000 脂质体转染入MGC803 细胞，RT-PCR 及蛋白免疫印迹法（Western Blot）筛 选最佳干扰片段。 3、应用四唑盐（MTT）法绘制细胞生长曲线，观察 HDAC1 siRNA 对MGC803 细胞增殖的影响；TUNEL 分析细胞调亡。 4、Western blot 检测HDAC1 siRNA 对BCL-2，Caspase-9、Caspase-3、P21、C-myc 蛋白表达及组蛋白H3、H4 乙酰化、组蛋白H3K9 甲基化的影响。 【结果】 1、HDAC1 在胃癌表达率73.71%，显著高于其他各组（P＜0.05），与胃 癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM 分期相关；组蛋白H3 乙酰化在胃癌 的高表达率41.17%，显著低于其他各组（P＜0.05），与胃癌的分化程度、淋巴结 转移有关。 2、筛选出最佳干扰片段，序号为sense 5-CCCGGAGGAA AGUCUGUUATT-3， antisense 5- UAACAGACUUUCCUCCGGGTG-3。3、HDAC1 siRNA 能上调P21 表达，抑 制MGC-803 细胞增殖；下调CL-2，Caspase-9、Caspase-3、C-myc 蛋白表达，诱 导细胞凋亡。4、HDAC1 siRNA 上调组蛋白H3、H4 乙酰化，下调H3K9 甲基化水平。 【结论】 1、胃癌组织中HDAC1 蛋白高表达，组蛋白H3 乙酰化低表达，与病理 分化程度及淋巴结转移等相关，提示HDAC1、乙酰化组蛋白H3 可能有促进胃癌的 发生、发展和浸润、转移的作用。2、HDAC1 siRNA 对MGC803 细胞有显著的抑制作 3 用，可抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，并可上调组蛋白H3、H4 乙酰化，下调H3K9 甲基化的表达水平；有望成为胃癌靶向基因治疗的新工具。其机制有待进一步研 究。 关键词：胃癌 组蛋白乙酰化 组蛋白甲基化 HDAC1 RNA 干扰 4 Abstract 【Objective】 To investigate the expression of HDAC1 and histone H3，H4 acetylation in gastric cancer tissue，we design a siRNA segments targeting HDAC1 gene to study the effect on cells growth，cells apoptosis and histone modification in gastric cancer MGC-803 cells line. 【Methods】 1. The expression of HDAC1，histone acetylation of H3，H4 was detected by immunohistochemical method in gastric cancer ，chronic superficial gastritis, atrophic gastritis and mediate to severe dysplasia. 2. Four siRNA segments ta