骨髓间充质干细胞对重症急性胰腺炎大鼠CD4%2bCD25%2b调节性T细胞的影响及中西医结合治疗.pdf

骨髓间充质千细胞对重症急性胰腺炎大鼠CD4+CD25+ 调节性T细胞的影响及中西医结合治疗 硕士生姓名： 李会朋 指导教师： 尚 东教授 指导小组： 刘晶教授 专业名称： 中西医结合临床 摘要 背景及目的：急性胰腺炎(acute panereafitis,AP)是临床上常见的急腹症之一， acute 其发病率高、临床病理变化复杂，尤其是重症急性胰腺炎(sgvere inflammatoryresponse panereatitis，SAP)并发全身炎症反应综合征(sygeIllic systemorganfailure，MSOF)时，病情 syndrome，SIRS)和多器官功能衰竭(multiple 发展快，死亡率高。SAP的主要病理特征为胰腺组织大范围出血性坏死，并可迅速 累及邻近周围组织。临床上大多数予以禁食、胃肠减压、补充血容量、改善微循 环、维持水电解质平衡、血液透析、镇静、解痉、抑制胰酶分泌、激素及抗生素 应用、外科手术、中药、营养支持等综合治疗方法，尽管近几年SAP病死率和并发 症有所下降，但目前的治疗均缺乏特异有效性，很难完全逆转病情的发展，治疗效果 marrow-derivedstemcells， 都不甚理想。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal BMSCs)具有取材方便、创伤性小、低免疫原性、可在体外大量培养扩增等特点。 近来国内外研究表明BMSCs可通过分泌一系列细胞因子和调节蛋白以对抗细胞凋 亡、器官纤维化和炎症反应，其免疫调节作用也表现在能够上调具有抑制性免疫 调节功能的CD4+CD25+调节性T细胞，从而对受损组织器官发挥保护和修复及控制 炎症反应的功能。 胞及炎症因子的影响，证实BMSCs在SAP时对抗炎症反应、保护和修复受损胰腺 组织的重要作用，为BMSCs在SAP的临床治疗应用提供实验依据。同时对SAP模型 大鼠进行中西医结合治疗研究，有助于为临床遏制急性胰腺炎病程进展，降低SAP 死亡率提供新的治疗思路。 方法：通过Percoll密度梯度离心法与全骨髓贴壁分离法分离、培养BMSCs， 获得第3代细胞。通过流式细胞术检测细胞表面标志CD45、CD90，同时应用成骨、 成脂肪样细胞诱导分化方法鉴定所获得的BMSCs。经十二指肠乳头逆行胆胰管注 入1．5％脱氧胆酸钠溶液的方法制备SAP大鼠模型。将健康SD大鼠随机分为5组，即 体BMSCs经尾静脉注射移植治疗；ZY组采用大承气汤灌胃治疗；ZXY组采用两种 量、测定血清淀粉酶与脂肪酶含量、观察胰腺大体解剖与组织病理学切片、流式 SAP大鼠的治疗作用并初步探讨其机制。 结果： ‘ 1．BMSCs呈纺锤形、三角形、多角形等形态，增殖快的细胞趋向集落样生长， 经过传代培养，细胞形态逐渐均一，组份逐渐得到纯化；流式细胞术检测显示， 诱导分化后茜素红染色阳性：成脂诱导分化后油红O染色阳性。 2．模型组大鼠术后24h，开腹可见胰腺肿大，出血坏死表现，腹腔内有大量血 性腹水，大网膜处见有浅黄色皂化斑。组织病理学切片见胰腺实质大片出血，凝 固性坏死，小叶结构模糊不清，胰腺组织间隙及实质内有大量中性粒细胞及单核 细胞浸润。各治疗组的各项指标变化程度均明显轻于模型组，其中ZXY组病变程 度最轻。 片管腔组织中有明亮蓝色荧光细胞，SAP组大鼠观察不到有明亮蓝色荧光的细胞。 提示BMSCs在SAP模型大鼠中能定位于受损胰腺组织。 治疗组较SAP组均显著性下降，且ZXY组下降水平最明显(P0．01)。 不明显，差异无统计学意义(P0．05)。 组均明显升高(P0．05)。 结论： 1．建立了良好的BMSCs分离、培养及鉴定方法，获得的第3代以后的BMSCs成 均一的纺锤形，纯度达到9