适合于MALDITOF质谱分析蛋白质及亚基SDSPAGE技术.pdfVIP

第 43 卷 　第 3 期 ( ) Vol . 43 　No . 3 厦门大学学报 自然科学版 　2004 年 5 月 Journal of Xiamen U niver sity (N at ural Science) May 2004 　 文章编号 (2004) 适合于 MAL D ITO F 质谱分析蛋白质及 亚基的 SD SPA GE 技术 方雪萍 ,黄河清 (厦门大学生命科学学院 ,福建 厦门36 1005) 摘要 : 介绍适合于 MALD ITOF 质谱分析蛋白质及亚基的 SDSPA GE 技术 ,其主要特点是采用铜染色法在凝胶板 上直接显色且采用有机溶剂萃取电泳纯的蛋白质和亚基 ,并用 MALD I TOF 质谱技术直接分析它们的分子量. 本技 术具有简便 、快速和损失率小等优点 ,尤其适合于蛋白质组学 、利用数据库分析蛋白质同源性和确定蛋白质种类等 结构信息的研究 ,是一种较为理想的 SDSPA GE 和 MALD ITOF 质谱非在线联用分析技术. 关键词 : 铜染 ; SDSPA GE ; MALD ITOF ;亚基 ;分子量 中图分类号 : Q 5 1 文献标识码 :A 　　　　　　　　　　　　　　　 ( [3 ] 　　十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶 电泳 SD S 对 SD S 等一些不可挥发的变性剂极为敏感 ,这使 ) ( ) PA GE 及双相凝胶电泳 2D PA GE 均是生化与分 SD SPA GE 和 MALD ITOF 质谱技术非在线的联 子生物学的常用分析技术之一 ,具有快速分离蛋白 用一直受到限制. 质和分析蛋白质分子量 、亚基与多肽结构信息等特 常用去除 SD S 的方法有多种 ,如色谱法 、超滤 点. 它与高效新型二维液相色谱系统和毛细管电泳 管脱盐法和冷丙酮沉淀法[4 ] 等 ,但这些方法对蛋白 仪等分离技术相比,SD SPA GE 技术的分辨率较低 , 质损耗量较大 ,不适用于微量或超微量分析. 缓冲液 尤其不太适合分析分子量低于 10 000 Da 的多肽与 体系可以提高 MALD ITOF 质谱分析的 SD S 容忍 蛋白质. 由于 SD SPA GE 技术所涉及的设备简单和 度[3 ] . 在常规 电泳过程中 ,考马斯亮蓝染色法和银 分析成本低廉等优点 , 因而仍然是 目前从事蛋白质 染色法均具有较高灵敏度的优点[5 ] ,但在染色过程 结构信息研究的首选分离与分析技术[ 1 ] . 基质辅助 中会使蛋白质变性而导致了蛋白质回收率很低. 相 ( 激光解吸离子化 Mat rixassisted laser desorption/ 反 ,铜染色法作为一种重金属负染法 ,不易使蛋白质 ionization wit h timeofflight , MALD ITOF) 质谱是 变性而有利于蛋白质的回收. 一种软离子技术 ,它与 SD S PA GE 相比,在分析蛋 目前 SD