酵母模型在Aurora-B激酶抑制剂筛选中应用.pdfVIP

中国抗生素杂志2009年9月第34卷第9期 ·529 · 文章编号：1001-8689(2009)09-0529-04 酵母模型在 Aurora-B激酶抑制剂筛选 中的应用 付达华 张晶 李妍 姜威 司书毅 (1漳州卫生职业学院， 漳州 363000； 2中国医学科学院医药生物技术研究所 ，北京 100050) 摘要：目的 以酵母细胞为模式菌高通量筛选微生物来源的Aurora．B激酶抑制剂。方法 以野生型酵母菌 Y300和 ipll-321 温度敏感型突变株为模式菌，筛选微生物来源的Aurora—B激酶抑制剂；体外酶学实验验证候选化合物对Aurora—B激酶的抑制作用； WesternBlotting分析候选化合物对肿瘤细胞中histoneH3磷酸化的影响。结果 JadomycinB显示出对 1．321温度敏感型突变株 的特异性抑制作用 ；体外酶学实验证实jadomycinB对重组纯化的人 Aurora—B激酶具抑制作用 ；jadomycinB能抑制多种肿瘤细胞中 histoneH3的磷酸化并呈剂量依赖性。结论 以Y300和 ipll一321酵母细胞为高通量筛选模型筛选到一个新的Aurora．B激酶抑制 剂jadomycinB。 关键词： 酵母细胞 ；Aurora—B激酶抑制剂； JadomycinB； HistoneH3； 酶学分析 中图分类号：R979．1 文献标识码 ：A Screeningofpotentialsmall-molecularinhibitorofhumanAurora-B kinaseusingbuddingyeast FuDa．hua ， ZhangJing， LiYan ， JiangWei and SiShu．yi (1ZhangzhouHealthCollege， Zhangzhou363000； 2InstituteofMedicinalBiotechnology，ChineseAcademyofMedicalSciences， Beijing100050) ABSTRACT Objective Tofindpotentialsmall-molecularinhibitorsfrommicrobialnaturalproductsthrough highthroughputscreening(HTS)usingbuddingyeastcells．Methods ／nvitrobiochemicalassaywasperformedtotest theinhibitionofcandidatesdeterminedbyHTSusingwild—typeyeastcellsand 1·321temperaturesensitivemutanton purifiedrecombinanthumanAurora-B kinase．WesternBlottingwasperformed todetemr inetheeffectofcandidateson thephosphorylationofhistoneH3onSerl0．Result JadomycinBinhibitedthegrowthof 1—321temperaturesensitive mutantmorestronglythanwild-typeyeastcells，moreoverjadomycinB inhibitedbothpurifiedrecombinanthuman Aurora—B kinase in vitro andphosphorylation ofhistoneH3 on Serl0 in tu