2高三生物复习精品课件选修1专题12_生物技术实践.ppt

三、微生物的分离与计数 1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 Ⅰ.分离分解尿素的细菌所使用的特定培养基 分离分解尿素的细菌的培养基应为选择培养基，培养基中的氮源只有尿素，理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。其配方如下： KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素(唯一氮源) 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用自来水定溶到1 000mL。 Ⅱ.统计菌落数目的方法 (1)显微镜直接计数法 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。 ②方法：用计数板计数。 ③缺点：不能区分死菌与活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法) ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 ②操作： a．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 ③计算公式：每克样品中的菌株数＝ ×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。 2．分解纤维素的微生物的分离 (1)分解纤维素的微生物的分离 ①实验原理 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 ②实验流程 土壤取样：富含纤维素的环境 ↓ 选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量 梯度稀释 ↓ 涂布平板：将样品涂布于鉴别含CR的纤维素分解菌的培养基(固体) ↓ 挑选产生透明圈的菌落：产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈。 (2)两种刚果红染色法的比较 ①方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，过程如下：培养基经涂布培养长出菌落→覆盖质量浓度为1 mg/mL的CR溶液 倒去CR溶液→加入1 mol/L的NaCl溶液 倒掉NaCl溶液→出现透明圈。 ②方法二：倒平板时就加入刚果红，过程如下：配制质量浓度为10 mg/mL的CR溶液→灭菌→按照每200 mL培养基加入1 mL的比例加入CR溶液→混匀→倒平板→接种后培养→出现透明圈。 4．(2009年烟台模拟)可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是 (　　) A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂 B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂 C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂 D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂 【解析】　在以尿素为唯一氮源的培养基中，不能分解尿素获得氮源的细菌不能生长，而分解尿素的细菌能利用尿素作氮源，将尿素分解为氨，使pH升高。若培养基中加入酚红指示剂，指示剂将变红。此培养基既属于选择培养基，又属于鉴别培养基。 【答案】　A 5．下图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据此回答有关问题： (1)要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌，从高温热泉中寻找耐热菌，这说明___________________。 根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找 (2)某同学根据需要，配制了纤维素分解菌的培养基如下，整个实验过程严格执行无菌操作。 如果将其中的纤维素粉换成________，菌落数____________________________，即可说明选择培养基的作用。 纤维素粉 NaNO3 Na2HPO4·7H2O KH2PO4 5 g 1 g 1.2 g 0.9 g MgSO4·7H2O KCl 酵母膏、水解酪素 0.5 g 0.5 g 适量 葡萄糖 明显多于选择培养基上的菌落数 (3)接种微生物最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，本实验宜采用________法， 原因是________________________________________________________________________。 稀释涂布平板 平板划线法难以根据稀释体积计算每克样品中的细菌数 【解析】　(1)因为纤维素分解菌与耐热菌有不同的生活习性，生活在不同的环境中，故要根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。(2)因为葡萄糖是纤维素水解的、能被微生物直接利用的有机小分子，所以如果将其中的纤维素粉换成葡萄糖，纤维素分解菌及其他细菌会生长繁殖得更快，故菌落数明显多于选择培养基。(3)因为稀释涂布平板法要将菌液进行一系列的梯度稀释，故该法可根据稀释体积计算每克样品中的细菌数，而平板划线法则不能这样，所以本实验宜采用稀释涂布平板法。 (高考浙江卷)下面是有关食醋和泡菜制作的实验。请回答： (1)食醋可用大米为原料经三步发酵来制作： 第一步：大米经蒸熟、冷却后加入淀粉酶，将原料中的