RP—HPLC法测定人血清中苦参碱浓度的方法学研究.pdfVIP

JIANGXI|oURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE RP—HPLC法测定人血清中苦参碱浓度的方法学研究 ★ 黄阿农 (浙江省永康市第一人民医院药剂科 永康321300) 摘要：目的：建立一种简易的方法测定成人血清中苦参碱的含量，便于临床药物浓度监测。方法：采用hypersilODSCI8色谱柱 (250mmx4．6mill，5 m)，流动相为(0．O1moL／L)磷酸二氢钾溶液-甲醇一磷酸(33：67：0．01)，流速为1．0mL·min～，检测波长 为229nlno结果：苦参碱保留时间为5．2min，标准曲线的线性范围为0．0625～4．0 g·mL。。，r=0．9996，苦参碱的高、中、低 日间、日内变异系数均在10％以下，~e--C-90％。结论：本法简便、快速重现性好，灵敏度高，-．j-~于人血清中苦参碱药物含 量检测及应用于临床治疗药物监测。 关键词：苦参碱；反相高效液相色谱法；血清浓度 中图分类号：R284．1 文献标识码：A 苦参碱 (matrine)是从豆科槐属植物山豆根(so． 流动相为0．01mol-L一磷酸二氢钾溶液一甲醇一磷酸 phoratonkinensisgagnep)分离提取的氧化苦参碱和 (33：67：0．01)；流速为 1．0mL·rain。。；检测波长为 极少量槐果碱的混合物，具有抗炎、抗病毒、免疫机 205nm；柱温为30℃。 制和抗肿瘤等作用，近年来发现它对病毒性肝炎亦 1．4 标准溶液的配制 精密称取苦参碱标准品 有明显治疗作用 。对苦参碱进行临床药物治疗 5．0mg，用甲醇配制含苦参碱 100Ixgm‘l 的对照 血药浓度监测非常有助于个体化治疗，但 目前国内 品贮备液；取适量贮备液，用 甲醇精密稀释成 l0 目前尚缺乏测定苦参碱血药浓度的简单易行方法， Ixg·ml的苦参碱标准品液，低温避光储存。 给临床合理用药造成一定困难。因此，本文对针对 1．5 样品预处理 取血清0．5ml加入一定量样品 国外相关文献报道的方法加以改进 ]，采用高效 标准液(10Ixg·ml )，加 甲醇O．3ml，加0．1mol／L 液相色谱法建立简单有效的苦参碱血药浓度检测方 盐酸5 漩涡混匀，4℃离心(3000rra‘in )10分 法，非常有助于该药的临床药物治疗监测及个体化 钟。取上清液一70℃冻存待测定。 用药 s-。 1．6 HPLC方法专属性 分别取样品血清、空白血 l 材料与仪器 清、标准品溶液5 进样，苦参碱保留时间为5．2 1．1 药品与试剂 苦参碱标准品由温州市华基化 分钟左右，无杂峰干扰测定。血清中苦参碱能得到 工有限公司提供，甲醇为HPLC专用色谱醇，磷酸二 较好的分离，与苦参碱对照品基本一致，故在此条件 氢钾和磷酸为分析纯试剂，水为去离子重蒸馏水 下所测的结果能代表原药浓度。 (用前过滤)，标准空白人血清由中国药品检定所提 2 结果 2．1 线性关系与灵敏度 取空白试管分别加入不 1．2 仪器 美国W t。rs高效液相色谱仪 (包括 同量的对照品溶液，再加入血清0．5mL，配成4．0、 Waters600型HPLC泵，Waters2996PAD型紫外检 2．O、1．0,0．5、0．25、0．125、0。0625 m‘L 7份标 测仪，w t。rs60o柱温控箱等)；EmpowerPro色谱数 准浓度溶液，按上述 “样品预处理方法”进行操作， 据工作站；1000、200、20 l微量注射器；50 进样 取3O 进样，以样品浓度 ()与样品峰面积(y)作 器；旋涡混合器；离心沉淀器。 线性回归，线性范围为0．0625～4·0 g。mL～，回归 1．3 色谱分析条件 色谱柱为 hypersilODSC18 方程为Y：0．05x+0．03—2．73e(r=0·9996，P 色谱柱(大连依利特公司250mmx4．6mm，5 )；