基于psbA-trnH序列鉴别溪黄草及其习用品的研究.pdfVIP

3lANGXIJOURNALOFTRADlTIONALCHINESEMEDICINE 基于psbA—trnH序列鉴别溪黄草及其习用品的研究 ★ 高蝶娜 范志高 (广州中医药大学第一附属医院 广州 510405) 摘要： 目的：利用叶绿体基因psbA—trnH序列探讨溪黄草及其习用品的分子鉴定方法。方法：分别提取线纹香茶菜、狭基线 纹香茶菜、纤花香茶菜及溪黄草的植物基因组DNA，经PCR扩增后测序，利用相关软件对序列进行分析。结果 ：线纹香茶 莱、狭基线纹香茶菜、纤花香茶莱的psbA—trnH序列长度为23lbp，植物溪黄草的碱基为309bp，共存在碱基差异13bp，缺失 78bp，种间变异平均距离为0．029。从构建的系统分支树可知，各物种虽能明显分开，但其支持率不高。结论 ：psM—trnH序 列不适用于鉴定溪黄草及其习用品。 关键词：溪黄草 ；习用品；psbA—trnH序列；分子鉴定 中图分类号：R282．5 文献标识码：A 溪黄草又名熊胆草、黄汁草、手擦黄，来源于唇 表 1样品信息表 形科香茶菜属植物线纹香茶菜Rabdosialophanthoi． 编号 材料 采集地 采集时间 标本号 Genbank号 des(Buch．一Ham．exD．Don)Hara的干燥全草 】，功能 线纹香 广东省华南药用 茶菜 植物种质资源库 2012．3．25JQE-022JX404028 清热利湿，退黄，凉血散瘀。主要用于湿热黄疸，湿 狭基线纹 广东省华南药用 热泻痢，跌打肿痛等证 ，是我国南方地区民间常 香茶菜 植物种质资源库 2012．3．25JQE-023JX404029 用中药材之一。现代药理研究表明，溪黄草具有抗 纤花香 广东省华南药用 茶菜 植物种质资源库 2012．3．25JQE-024JX404030 炎 、抗病毒 、抑菌、护肝 、抗肿瘤及增强免疫力等作 广东省华南药用 用 ，日益受到众多专家学者的关注。 4 溪黄草 植物种质资源库 2012．3．25JQE-021JX404031 同时，当前市场上的溪黄草还存在着习用品众 1．2 试 剂与仪 器 多的情况 。同属植物狭基线纹香茶菜Rabdosia 植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根生物技 Lophanthoidesvar．Gerardiana(Benth．)Hara、纤花香 术有限公司)；10~PCRBuffer缓冲液、Tris碱 (上海 茶菜RabdosiaLophanthoidesvar．graciliflora(Benth．) 爱紫特生物科技有限公司)；TaqDNA聚合酶、 Hara和溪黄草 Rabdosiaserra(Maxim．)Hara在 民间 dNTPs(TaKaRa宝生物工程 (大连)有限公司)；PCR 常用来充当中药溪黄草的习用品而加以使用 。国 扩增引物合成 (广州赢森生物科技有限公司)； 内已有众多专家学者从药材性状鉴别、显微鉴别以 D一37520型 台式离心机 (德 国Eppendorf公司)； 及理化鉴别的角度鉴别溪黄草及其习用品 ，但有 PTC一100型 PCR仪 (美 国MJResearch公 司)； 关其分子生物学方面的研究仍然较少 ，Genbank上 DDY—m型电泳仪 (北京六一仪器厂)；凝胶成像系 有关其序列登记的信息亦较少。本文拟通过对比 统(美国BIO—RAD公司)。 研究溪黄草及其习用品的叶绿体基因psbA—trnH序 2 方法 列的差异，从分子生物学的角度探讨其差异 ，为溪 2．1DNA的提取 黄草及其习用品的鉴别提供新的参考依据。