坛紫菜别藻蓝蛋白的纯化及多克隆抗体的制备.pdf

高技术通讯 年 月 第 卷 第 期 2006 6 16 6 坛紫菜别藻蓝蛋白的纯化及多克隆抗体的制备! ! 李博文 左正宏 董宏坡 李勇斌 陈奕欣 （厦门大学生命科学学院 厦门361005 ） 摘 要 通过液氮研磨、超声波破碎、硫酸铵分级沉淀和 DEAE-sephadex-A-50 柱层析等手 段，建立了从坛紫菜叶状体体细胞中快速高效纯化别藻蓝蛋白的技术，并以该蛋白为抗 原，通过动物免疫，制备了抗别藻蓝蛋白的多克隆抗体。电泳及 Western 印迹杂交分析的 结果表明，纯化的别藻蓝蛋白已达到电泳纯， 达到 ，计算蛋白回收率为 A650 / A280 3 . 5 70 . 5 % 。制备的多克隆抗体特异性强，效价高达 1 1 100 000 。本研究的结果为进一步研究 别藻蓝蛋白的功能和进行开发提供了基础材料和有用的工具。 关键词 坛紫菜，别藻蓝蛋白，蛋白纯化，多克隆抗体 学院上海实验动物中心。 0 引 言 ! # 主要药品试剂 别藻蓝蛋白（ ， ）是一种藻胆 购于华美生物工程公司， aIIophycocyanin APC DEAE-sephadex-A-50 蛋白，它作为捕光和激发能传递物质，在藻类的光合 福氏完全佐剂和不完全佐剂为 公司产品， sigma HRP ［］ 作用中起重要的作用 1 ，同时它也是一种待开发的 标记羊抗兔抗体购于北京中杉金桥生物制品公司， 海洋活性物质。目前，有关别藻蓝蛋白在食品工业、 ’，’二氨基联苯胺（ ），，，， 四甲基联苯胺 3 3 - DAB 3 3 5 5- 抗肿瘤等医疗保健药物开发方面的研究已成为海洋 （ ）等购于北京化学试剂公司，其它试剂为国产 TMB ［ ］ 生物活性物质开发和应用研究的热点2-9 。但目前 分析纯。 对藻胆蛋白的提取纯化技术的研究主要在螺旋藻等 ! $ 方法 ［， ］ 原核藻类中开展 2 10-12 ，在真核藻类中的研究虽有 1 . 3 . 1 别藻蓝蛋白的纯化 一些报道，但主要是藻红蛋 白和藻蓝蛋 白的提 取适量阴干坛紫菜用蒸馏水洗涤 次，吹干，用 3 ［ ］ 取 13-15 。一些学者虽有尝试了一些从紫菜中分离 液氮将其磨成粉末，悬浮于抽提液（