6-DMAP和胚胎干细胞代数对异种重构卵体外发育的影响(简报).pdf

第36卷第2期 实验生物学报 v。1·36，N。‘2 2003 Acta Sinica April 2003年4月 BiologiaeExperimentalis 6-DMAP和胚胎干细胞代数对异种 重构卵体外发育的影响(简报)* 王 陈大元》” 鸿1，2，3郑瑞珍2廉莉3徐营3，4安利佳1 (1大连理工大学生物工程系，大连116012；2中国科学院发育生物学研究所分子发育生物学开放实验室，北京100080； 3中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室，北京100080；4南京农业大学动物科技学院，南京210095) 关键词：6-DMAP胚胎干细胞异种核移植胚胎发育 醴({巧 ，A 核移植技术已经广泛应用于动物克隆，但是克 研究。在胚胎发育的研究中6-DMAP是一种蛋白 隆动物的成活率仍然很低【1_3]。许多克隆胚胎死 于妊娠期，少部分能发育到期，正常出生，但多数在 moting protein 出生后由于心肺和消化道的问题，很快就夭折，有些 kinase)的磷酸化影响染色质和微管的形成，破坏了 克隆动物有异常表型，如出生时体重和胎盘过大 纺锤体，使卵母细胞不能进行减数分裂和排放第二 等[2]2。研究发现，在同种克隆动物实验中用胚胎干极体，而直接进入细胞间期，卵细胞内只形成一个二 stem 倍体的原核，当这种卵细胞被激活时就直接进入分 cell，ES细胞)作为核供体，发 细胞(Embryonic 育到期的克隆动物比例明显高于体细胞，并且用杂 裂中期，进而进入胚胎细胞周而复始的周期循 交一代的小鼠ES细胞为核供体，绝大多数克隆仔 环[13|。 鼠都能存活到成年，而近交品系的小鼠ES细胞为 我们用ES细胞进行异种克隆，已经证实ES细 核供体，出生的仔鼠没有一个能存活到成年bJ。最 胞异种重构胚比成纤维细胞异种重构胚在体外发育 近我们在异种动物克隆实验中又进一步证明ES细 的能力强(资料待发表)。为了进一步了解影响ES 胞作为核供体，在异种克隆中同样有较高的囊胚发 细胞异种重构胚体外发育的因素，我们用培养不同 育率。由此可见，要提高克隆动物的成功率，供体细 代数的ES细胞作为核供体，分析不同代数的ES细 胞核的遗传组成和遗传状态是十分重要的。此外在 胞和不同激活方法(尤其是6．饼儿奸)对异种重构胚 核移植过程中，供核细胞培养的代数对重构胚胎的 体外发育能力的影响；用二次电脉冲加6-DMAP和 发育也有影响[4“]。细胞在体外培养时为了适应 单独用二次电脉冲激活ES细胞．兔异种重构卵，观 体外的培养环境，随着培养时间的延长，培养系统中 察6-DMAP对异种重构卵的卵裂率和囊胚发育率 不良因素的累积性影响，有可能使细胞发生基因突 的影响。 选择健康的成熟雌性日本大耳白兔作超排处 变，包括核型的改变、基因印迹(imprinting)的丢失 和俄甲基化的改变。当基因组发生这些变化时，可 理，得到MⅡ期卵母细胞，在显微操作仪上，用注射 针吸去第一极体及其下大约10％一20％的细胞质。 能扰乱了“重编程”(reprogramming)的顺序或引起 “重编程”不全，从而使细胞核失去指导胚胎正常发 去核的卵母细