CCR5稳定表达的CHO细胞的构建.pdf

第27卷第3期 衡阳师范学院学报 No．3V01．27 2O0 Journalof Normal 6 6年6月 HengyangUniversity June．200 CCR5稳定表达的CHo细胞的构建 王芳宇1， 潘忠诚2 (1．衡阳师范学院生命科学系，湖南衡阳421008； 2．哈尔滨工程大学化工学院环境工程系，黑龙江哈尔滨 150001) 摘 要：在人体内，CCR5与许多免疫疾病有关，CcR5有望成为众多药物的作用靶点。将ccr5基因与真核表达 CCR5在CH0细胞得到了稳定表达。 关键词：趋化因子受体5；中国仓鼠卵细胞；转染；表达 中图分类号：Q7 文献标识码：A 文章编号： 1673一0313(2006)03一0066一04 chemokine5， 趋化因子受体5(CC receptor CCR5)是CC亚族趋化因子MIP一1a(macrophage本室保存。中国仓鼠卵细胞(CHO) (ATCC保 1a)、MIP一1 inflammatoryprotein 藏)由广东省农科院曹汉威研究员转赠。 B和RANTES onactivationnormalTcell 1．1．2 (regulated expressed 主要试剂 and X妇I、B口研H secreted)的特异性受体。CCR5具有G蛋白偶 I、Hi行dⅢ、T4DNA连接酶、 联受体家族(Gproteincoupledreceptors，GPCRs)而gDNA聚合酶购自华美生物工程公司；DNA快 所特有的7个跨膜区(transmembranedomains， ExtractionMini 速胶回收试剂盒(Gel Kit)，上海华 TM)，呈a螺旋，胞内包括三个内环和c一端；胞 外包括三个外环和N一端。在人体内，CCR5与许1ansfection 多免疫疾病有关，如：关节炎、多发性硬化症、 肾的同种异体移植H]、肿瘤瞳3和动脉粥样硬化跚 等，特别是近年发现CCR5可以作为HIV感染的 辅助受体，并在HIV从一个个体转移至另一个个 体时起着重要作用[4]。本文通过构建ccr5真核表 gromycin 达载体pBBS242一ccr5并转染CHO细胞，以期构 建CCR5稳定表达的CHO细胞(CHO／CCR5细(N端mAb)为美国R＆D Systems公司产品； 胞)，为CCR5药物筛选提供一个基础。 1．2 方法 1．2．1 1材料与方法 一ccr5)的构建 1．1 材料 I+X6a 用Bn加H 1．1．1 菌株、质粒和细胞株：菌株E．fozi基因、切开pSP72质粒并分别回收，用T4DNA连