ELISA对IBV毒株定性检测方法的建立与应用.pdfVIP

维普资讯 第 22卷 第 1期 华南农业大学学报 Vo1．22，No．1 2001年 1月 Journal0fSolnhChinaA cIIltu University J锄 2~O1 文章编号：1001—411X(2001)01—0074—04 Mab—ELISA对 IBV毒株定眭·检测方法 的 建 立 与 应 用 王林川，黄爱芳，游 洪 (华南农生大学动转医学系，广末广州 51o~2) 摘要 ：针对禽传染性支气管毙病毒 (1By)血清型众多、临床检测不易的难题 ，用我 国自己研制的2株 IBV单克隆抗 体 ，通过多种方法的比较与鉴定 ．建立起适用于定性检测 IBV的包被鼠裱 IBV单抗 的Mvb-EL~A方法 ，其操作程 序是 ：包被 鼠源 IBV单抗 一被检病毒 一鸡抗 IBV高免血清 一兔抗鸡 Igc(AGP效价 1：32)一羊抗兔IgG—HPR；用 车方{岳对国内46个 IBV分离株及 NDV、AIV-H9N2、PPMV-I等的检测 ，表明其具有较好 的特异性和敏感性 ． 关t铷 ：禽传染性支气管炎病毒 ；单克隆抗体 ；酵联免疫吸附测定{击 中圈分类号：$855．3 文献标识码：^ 禽传染性支气管炎(IB)是由禽传染性支气管炎 治提供科学依据． 病毒引起的一种急性、高度接触性的传染病 ．主要侵 1 材料与方法 害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统，使病鸡 出现呼吸困难 、肾脏病变、产蛋下降及蛋品质降低等 1．1 材料 症侯 ．IB还可使鸡的增重和饲料报酬降低；作为病 (1)ELISA板 ：进 口；EHSA检测仪 ：BioRAD455 型 ． 因之一参与混合感染引起鸡的气囊炎，从而使 肉鸡 (2)鸡抗 IBV高免血清、兔抗鸡 IgG：自铷 ． 在加工过程中废弃率增高 ；另外，幼雌鸡感染会 引起 (3)单克隆抗体：鼠抗 IBV单抗膜水 B1C11， 输卵管永久性退化，这对蛋种鸡场而言则更是灾难 ． B4D2(南京农业大学动物医学院陈溥言教授赠送)． 传染性支气管炎首先于 1931年报道于美 国…， (4)酶标抗体：羊抗 鼠IgG．HRP，羊抗兔 1936年确定本病病原为病毒 ，之后命名为传染性支 HRP．从华美公司广州分公司购买，工作浓度1：1000． 气管炎病毒 (IBV)J，现已证实为冠状病毒科的一种 (5)被检抗原 ：国内46株 IBV分离株 ，IBV标准 病毒．50年代以前 ，首先 由美国鉴定有包括马萨诸 毒株 M41，H120，H52，Gray；P4 (PPMV．I)、SlO 塞的几个血清型 ．在荚 国，直至 8o年代才 由 Cook (A／Chleken／9801／GuangdongH9N2)、NDV (La )． 等 3【,4]报道在免疫过鸡群仍有 m 的暴发，并发现从 均为华南农业大学动物医学系禽病室保存 ． 这些暴发鸡群中分离出来的毒株存在有不同于疫苗 (6)溶液 ：A．包被液，B．洗涤液，c．保温液 ， 株的血清型 ．现在已报道的血清型已达 20多种 ，变 D．底物溶液 ，E．终止液 ．均接常规方法配制 ． 异株剐不断被鉴定出． 1．2 包被翕毒的M且b．ELISA检测 IBV (1)基本