一种纯化尿激酶的新方法.pdfVIP

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厂… 维普资讯 / 一 1996年(10卷)第l0期 r}化q工—纵q横1i 化 工 时 刊 — … t一 是用一种新的离子交换材料 SOURCE15S简便、快速地将 比活 20·473IU/mgprotein 的粗 嬲 批 舯 80,。64IU p 接/mg 龇 l 关键词垦墼醒SOURCE15S苎、l屯rote)f印芎’怕令 tJ1 一 、 仪 器 粗品尿激酶用离子交换 RESOURCE S纯化 FPLC Sytstem (Pharmac~ BiotechCo,) (见图),经测定只有峰 (Ⅱ)具有活力 通过采用 紫外分光光度计 (上海分析仪器厂) 不同的平衡及洗脱条件,分析蟑 (Ⅱ)的活力和 比 二 、材料和方 法 活 ,筛选出最佳纯化条件 .见表 : (-- )材 料 由上表可见较适 pH3.0~5.0,氯化钠浓度 1.粗品尿激酶:比活 o0,{73IU/mgProtein, 0.5mol·dm ~1.0otol·dm一。最佳条件是序号 种卅 I4, J【IlIl: ·晰束J学生物化学厂) 12,即平衡为 50mmol·dm 磷酸缓冲 ,pH4.0,洗 :.K 、【llL~CE 51ml(SOURCE 15S预装 脱为 50mmol·dm 磷酸缓冲 +0.5otol·dm 氯 i 5 IllIJI 5Omm,Pharmacia BiotechCo .) 化钠,pH4,0,可一步将粗品尿激酶 (活力 485。10 3.其它化学试剂:分析纯 (南京化学试剂厂) 0IU),比活 20,473IU/mgprotein)纯化到活力 (:) 方 法 468,121IU (收率 96.5 ),比活 180,864IU/ I.纯化尿激酶 的方法 在 FPLC上安装好 mgprotein的精品。 RESOURCE SIml预装柱,用 5倍床体积的磷酸 四 、 结 论 缓冲液 (缓冲A)平衡 。取粗品尿激酶 33rag溶解于 由于 SOURCE 15S的高载 量 性 (23.7mg 2ml缓冲 A 中,再用 0,2pm滤膜过滤,滤出液上 proteln/m1)、高流速性 (932.5cm/h)以及上述的 RESOURCE S柱 ,保持流速 5ml/min(932.5cm/ 实验结果,所以用SOURCE 15S可以简便、快速 h),用缓冲 A洗涤 10倍床体积 。缓冲A 内加入氯 地纯化尿激酶,并可用于工业生产规模 。 化钠 (缓冲 B)进行梯囊洗脱,洗脱体积为40倍床 t .._ . II1:盎譬号篇鞋 皇 };= 体积,梯度为 (0--]00) 缓冲B。用组分收集器进 f, . ! 行组分收集,测定各组分的活力和比活。实验过程 ’ jj j 见图 (28Ohm紫外吸收):

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