一种蛋白质含量测定方法的改进研究.pdfVIP

维普资讯 i检 测 《品斟工业》2·005年第26奠第 18期 一 锄 厨 量渤磨 固蘧固醑窝 周东凯 富雪菲 吴 刚 马学 良 杨翔华 崔金久 赵海峰 刘志刚 在食 品、医药 、生物学 、生物化学 中常用到蛋 白质 1．2 实验步骤 含量的测定 ．随着分析手段 的不断进步 ．蛋 白质含量 1．2．1 纳 氏试剂 比色法]二作 曲线确定 的测定方法也正在 向准确 、快速 的方向发展 根据蛋 称 取 3．819g在 100℃条 件 下 干 燥 过 的 无 水 白质的性质 ，测定方法分为两大类 ：一类是利用蛋 白 NH4Cl，用去离 子水 定容 至 l000m1．氨氮浓 度为 质的共性 ．如含氮量 、肽键和折射率等测定蛋 白质含 1．0mg／ml。取出 10．00ml该溶液转入 1000ml容量瓶中 量．通常采用经典的凯 氏定氮法I1一．目前 已有采用红 定容 ，则此时氨氮浓度为 0．01mg／ml，分别取此溶液 0、 外连续消化、自动蒸馏和 自动滴定装置的自动凯 氏定 0．50、1．00、2．00、3．00、4．00、5．00、7．00、10．00ml于 50ml 氮仪 ：另一类是利用蛋白质中特定氨基酸残基 、酸性 比色管 中，加无氨水至标线 ．先加入 1．00ml酒石酸钾 基 团 、碱性基团和芳香基团测定蛋 白质含量 ．有水杨酸 钠溶液充分摇匀 ．再加入 1．5ml纳 氏试剂摇匀 ．10mi 比色法 3_『、双缩脲法f、皮尼克法 、Bradford检测法 (考马 后 ，以空 白试剂为参 比．用 lcm 比色皿在 420nm处测 斯亮蓝染色法)151、Lowry检测法 (FoLin一酚试剂法)、二 定吸光度 ，绘制标准 曲线 喹啉甲酸 (BCA)检测法16／、紫外吸收法 、荧光探针法17]、 1．2．2 凯 氏滴定法实验步骤 近红外透射光谱法 、高效液相色谱法及毛细管电泳 1．2．2．1 消化 分析法 。此外 ，还有更为先进 的罗丹 明6G生物探针 1【f】I、 准确称取 2．000g干酪素．放入 250ml凯 氏烧瓶 高光谱遥感技术…瞎测定蛋 白质含量的方法 基于凯 中，加入混合消化液 (硫酸 -双氧水 -水：2-3-1) 氏定氮法的准确度和普遍性 ．本实验采用凯 氏定氮 20ml，催化剂为 1-1的硫酸钠和硫酸铜 2g。将烧瓶置 法 ．并对蒸馏后产物 的处理方法进行 了改进 ．将蒸 出 于 电热套中加热消化 ．先低温加热 ．10min后升温．使 液用纳 氏试剂进行 比色 (以下称该法为凯 氏比色法)． 瓶 内液体微沸至呈蓝绿色透 明．继续保持微沸 ．待消 快速确定氮含量 ．提高 了定氮实验 的准确性和可操作 化彻底 ．转移到容量瓶定容 500m1．待用 以后每次取 性 。避免 了凯 氏定氮法 中盐酸标准试剂浓度确定的麻 2ml液体测定 烦操作 、滴定过程终点不好控制等 问题 ．大大减轻劳 1．2．2．2 蒸馏 动强度与劳动时间。实验 中利用NHC1作基准物 ．将 将凯 氏烧瓶按蒸馏装置连好 ．以5．0ml硼酸为吸 改进法测定结果与实际氨氮加入量进行 比较 ．结果表 收液，于其中加入 3滴甲基红一溴甲酚绿指示剂 ．从漏 明改进法对测定蛋 白质含量是可行 的 斗中加入 40％的NaOH溶液 2m1．边加边摇动凯 氏瓶． 1 实验部分 直至瓶 内液体变为深蓝色．再加热蒸馏至氨全部蒸出 1．1 实验仪器与药品 1．2．2．3 滴定 凯 氏定氮装置 、101—1A 型数显式恒温干燥箱 (上 将上述馏