人体外周血染色体G显带制备时的影响因素及补救措施.pdfVIP

Journalof BirthChildCareV01．16No．5 2010 ·265’ 中国优生优育2010年5月第16卷第5期ChineseHealthy May ·经验介绍· 人体外周血染色体G显带制备时的影响因素及补救措施 张颖珍 摘要 染色体G显带是研究染色体数目和结构畸变的基础，整个制片操作繁琐，收获时间较长，秋水仙素、制片过程等因素 都将影响染色体标本的最终效果。 关键词染色体G显带制备影响因素补救措施 染色体G显带是研究细胞遗传学的基础，被广 外，接种血液时，血液量多少也会对染色体培养结果 泛地用于基础医学、临床医学的研究和染色体病的 产生一定的影响。血液太少，细胞稀薄使生长速度 诊断。整个制片操作繁琐，收获时间较长，任何一个 减慢；血液太多，会造成培养细胞生长时营养成份不 步骤操作不当，均可能影响染色体标本制备的最终 够，影响细胞存活，我们一般接种0．3mL左右的血 效果。为了解决这一问题，我们反复试验和研究，总 液。培养过程中，注意观察培养液有无凝血、溶血或 结了一些经验。 长菌的现象，可将培养瓶轻轻振荡，使凝块散开，以 便细胞获得充分的营养，然后放回37℃恒温箱内继 1染色体G显带玻片的制作 续培养，最好每天轻轻震荡混匀1次。 1．1 取血购买一次性真空采血肝素抗凝管与一 1．3秋水仙素秋水仙素在细胞培养分裂中所起 次性采血针配套使用，常规消毒肘部皮肤，抽取静脉 作用是与微管形成或解聚密切相关的。秋水仙素一 血1—1．5 mL，轻轻摇匀，防止凝固，待接种培养。 方面能阻滞微管(纺锤丝)形成，或使已形成的微管 接种的血样愈新鲜愈好，最好是在采血后24h内进 解聚；另一方面，秋水仙素的作用又能促使DNA的 行培养，如果不能立刻培养，应置于4℃冰箱存放， 复制和有关蛋白质合成…。可见秋水仙素抑制中 避免保存时间过久，以免影响细胞的活力。 期分裂不是完全持久的，虽然破坏了细胞中微管组 1．2细胞培养基与接种血液量人体外周血中的 装，阻止了纺锤体正常生成，使细胞分裂失去了动力 小淋巴细胞，是已分化、处于G。期的细胞，几乎不具 来源，从而在染色体复制后期细胞不能一分为二，但 有分裂增殖能力，在离体血培养细胞中很难找到正 是染色体数却加倍了。另外，秋水仙素是一种有毒 在分裂的细胞。因此，将一定量的外周血放人含植 物质，由于用量少，人们几乎忽略了它对环境的影 响，但它对生物体的毒害作用是显而易见的。因此， 物血凝素(PHA)(植物血凝素可以刺激小淋巴细胞 重新进入增殖周期)的培养基中培养，72h左右细 在血细胞培养时，秋水仙素加入的剂量、浓度及处理 胞处于分裂的不同时期，此时加入秋水仙素可获得 时间与中期分裂相的多少和染色体长短有密切的关 大量的中期分裂相细胞。培养基为培养的细胞提供 系。在秋水仙素浓度对染色体有丝分裂阻断率的影 营养，培养基成份中的小牛血清和植物血凝素的含 响方面，陈德清教授等进行了大量的工作旧1。一般 量偏高或偏低，PH值的变化情况，均可导致染色体 若秋水仙素浓度大，则处理时间短，如浓度小，则处 分裂指数异常。培养摹配制时，无菌操作和玻璃器 理时间长。但若秋水仙素加入过量，或处理时间过 皿的清