壳聚糖介导RNA干扰沉默CXCR4基因对食管癌细胞增殖、侵袭力的影响.pdf

ACADEMIAEMEDICINAEXUZHOU ·6· 徐州医学院学报ACTA 2015，35(1) 壳聚糖介导RNA干扰 沉默CXCR4基因对食管癌细胞增殖、侵袭力的影响 万一元，万莉，惠红霞，王晓炜，程劲松 (南京医科大学附属淮安第一医院肿瘤内科，江苏淮安223300) 摘要：目的探讨沉默CXCR4基因对食管鳞癌ECl09细胞体外增殖、侵袭能力的影响。方法化学合成两 对针对CXCR4基因的干扰序列(实验序列、对照序列)，构建表达小发夹RNA(shRNA)的质粒，以壳聚糖为基因 载体转染人食管癌ECl09细胞。荧光显微镜观测转染效率，Westernblot法分析转染前后CXCR4蛋白的变化，集 血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平的变化。结果酶切电泳、测序证实成功构建靶向CXCR4基因的shRNA表 达质粒。以壳聚糖为载体转染HEK293A，转染效率达80％以上。与空白对照组、实验对照组比较：转染实验组质 粒能明显下调CXCR4蛋白表达；抑制ECl09细胞增殖，影响其集落形成能力；降低ECl09细胞穿膜数目，影响其 h及72h后与空白对照组、实验对照组比 侵袭能力；时间依赖性降低ECl09细胞上清液中VEGF水平，转染48 较，差异有统计学意义(P0．05)。结论CXCR4基因在食管癌细胞生长、侵袭方面发挥重要作用，沉默其表达 可降低食管癌细胞增殖，抑制肿瘤细胞集落形成和侵袭能力，抑制细胞分泌VEGF能力。CXCR4基因有可能成 为食管癌治疗新的、有效靶点。 关键词：食管癌；CXCR4基因；RNA干扰；壳聚糖 中图分类号：R735．1；R73—36文献标志码：A 文章编号：1000—2065(2015)0l一0006—06 Effectof vector CXCR4 chitosan silencingby onthe andinvasionof carcinomacells proliferation esophageal WAN Li，HUI Xiaowei，CHENG Yiyuan，WANHongxia，WANG Jinsong ofMedical First ofHuai’anAffiliatedof Medical (DepartmentOncology，theHospital Nanjing University， 223300，China) Huai’an，Jiangsu the To effectsofCXCR4 chitosanvectoronthe andinva— Abstact：Objectiveinvestigate silencingby proliferation sionof carcinomacelllineECl09invitro．MethodsTwo ofCXCR4siRNA were esophageal pairs sequencesche