外源蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的新策略.pdf

!!!!!!! ! 研究快报 ! ! !!!!!! 外源蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的新策略 赵志虎 张用书 刘传暄 马清钧 （军事医学科学院生物工程研究所 北京 !;;JQ; ） 大肠杆菌是最常用的遗传工程宿主，但是，外源蛋白在 载体。为了克服融合表达载体的缺点，为生物工程产业提供 大肠杆菌中表达，往往形成包含体。包含体的形成，在一定 非融合的可溶性表达载体，我们在融合表达的基础上，分别 程度上限制了原核载体 宿主系统的应用，为了克服包含体 以原始质粒 、 、 为基础，通过定点 10UU2/V 1@DZ *0 1^0‘ U ! ! ! 的形成，目前常用的策略是分子伴侣（如 、 ）、 突变等操作，利用翻译偶联现象，分别构建了三种双顺反子 ^/(0Z_ 0I N#,C 折叠酶系（如 、 ）、“分子内伴侣”（如 、 、 表达载体 、 、 ，上述载体在保留原 N4HDP8 RR\ U2/V ^IU IRD 1U\^ U2/V 1U\^ @DZ 1U\^ ^IU ! ! ! 等）甚至一些短肽的共表达或融合表达，上述策略虽然可以 有特点的基础上，还具有以下特点： 含有原核翻译增强序 减少甚至完全避免包含体的形成，但都存在一定的缺点，如 列以及远上游调控元件（ ），可有效调节目的基因的表达； 0 分子伴侣的作用存在明显的蛋白特异性，对不同蛋白辅助折 序列可方便替换，通过调节 序列的组成、数目及与 #IN IN 叠效率不一样，对有的蛋白，甚至根本就不起作用，表现出相 DU^ 的距离，可对翻译起始区结构进行优化，有效调节目的 当的“自私性”，此外共表达时，还需要考虑两个表达质粒的 基因的表达； 含有常用的 、 、 、 、 $ ’( W % )*! % +#,? % -#$ % 相容性，操作起来也比较麻烦。而融合表达，目的蛋白需经 、 等常见酶切位点，可用于目的基因的插入。 ./ % 012’ 过切割等步骤才能得到。因此，如何寻找新的策略，实现外 利用上述表达载体，我们已经实现了 、 、 、 、 \Z Q Y ^ ! ! ! ! ! 源蛋白的可溶性表达，具有多方面的意义。