大孔吸附树脂分离纯化谷胱甘肽(GSH)的研究.pdf

第；蕊荤；膂 发酵科技通讯 大孔吸附树脂分离纯化谷胱甘肽(GSH)的研究 苑成伟 王家骐 朱立江 (河北梅花味精集团公司河北廊坊065702) 分离纯化GSH工艺可行。 关键词：谷胱甘肽；分离纯化；大孔吸附树脂 谷胱甘肽是由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸文通过研究对啤酒废酵母的预处理及细胞的破 缩合而成的含巯基的生物活性三肽化合物【11。普遍存 碎，得到富含谷胱甘肽的酵母抽提液，将抽提液上 在于细胞中，是一种重要的抗氧化剂，在动物组织， 离子交换柱分离，研究了离子交换树脂对GSH的 植物组织，细菌和酵母内巯基(s}D最为丰富的化合静态吸附量及洗脱条件对分离纯化产品的影响。 物，有护肝、解毒、抗氧化等多种医疗功能，被称为长 最后使用HPLC对所得GSH产品进行了鉴定。采 寿因子和抗衰老因子回。目前GSH的主要生产厂家 用D001大孑L吸附树脂分离纯化GSH目前未见 有J．T．Baker、BDH、Fluka、E．Merck、Riedel--deHaen、文献报道。 Sigma及13本和光纯药等国外公司。其应用正引起 1材料和方法 人们日益广泛的注意，国内市场空间广阔131。现GSH 的国产化，不仅可改变我国谷胱甘肽依赖进口的局 1．1材料 面，而且对我国医药工业，临床医学和食品工业具有 1．1．1试验材料 重大的社会效益和经济效益。 啤酒酵母：由上海复旦大学提供。 报道的GSH的分离纯化方法主要有铜盐法， 1．1．2主要试剂 双水相法和树脂法。铜盐法因其污染严重，收率 大孑L型弱酸性丙烯酸系阳离子树脂(D001)， 低，其发展受到滞控；双水相法效果较好，但双水 廊坊电力树脂厂(功能基团-SO，H，全交换容量 相系统设备昂贵，操作条件苛刻，实现其工业化较 为困难，目前还只处于实验阶段；树脂法具有污染 小，操作便利，经济效益好等优点，目前在食品医 那司科技有限公司)；亚硝基铁氰化钠；氨水；硫酸 药等领域广泛应用。国外用树脂法提纯食品医药 铵；95％乙醇；85％磷酸；考马斯亮蓝G一250；均为 已有多篇日文专利和文献报道，【4J发展日趋成熟。 国产分析纯。 大孔吸附树脂是一类新型的多孔性高聚物吸 1．1．3试验仪器 附剂，其分离机理为吸附原理和分子筛原理，主要 ①2．6cmx60cm玻璃层析柱； 通过分子间作用力如范德华引力或氢键等对被吸 752型紫外可见光光度计(上海光谱仪器有 附的分子进行吸附，吸附剂表面的亲水性或疏水 限公司)； 性决定了其具有不同的吸附特性；同时本身的多 LGJ一12冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展 孑L性结构亦决定其具有一定的分子筛作用旧。本 有限公司)； 万方数据 9 2XZ-2型旋片真空泵(浙江黄岩求精真空泵厂)； 说明样品中存在交换能力强于GSH的氨基 BSZ一100自动部分收集器(上海沪西分析仪 酸或多肽类物质，它们与GSH竞争离子交换，被 器厂)； 优先吸附于树脂柱上，而部分大分子蛋白质则被 BT-101电子蠕动泵(上海沪西分析仪器厂)。截留在大孔树脂空隙中，从而去除了部分不吸附 1．2试验方法 的蛋白质和吸附能力比GSH强的小分子物质，最 1．2．1GSH的提取制备 终达到GSH的提纯效果。收集GSH高峰区样品， 采用酒精浸提法制取GSH抽提液[sl。 可进一步达到优化效果。 1．2．2树脂的预处理[61 2