基因DNA制备方法的探讨.pdfVIP

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维普资讯 第 l2卷第 9期 黔置 VMdfl1y220N0029 2002年 5月 基因DNA制备方法的探讨 天津医科大学总医院儿科 (天津300052) 刘伙玲 倪 晓燕 马成成 目的:探讨基因姐 Dm 的制备方法。方法:酚 一氯仿法、改 良盐析法庭 口腔粘膜法 结果:三种方法挺 取的D A产量均能满足 PCR及基圆分型的需要 。结砖 :改良的盐析法辊峙简单、经济和恢连 ,曼适合临床上 基因诊断 的需要 ;而 口腔粘膜法特别适用于儿童度 家系调查。 关键词 DNA 制备 盐斩 上皮细胞 分类号 Q78 PREPARAT10N M ETH0DS0F GEN0M IC DNA LiuFuling,N Xiao3~tn,MaXiancheng PediatricDepartment,TianjinUniversityofMedic*lSciences,Tianjin300052 [Ahstrac1]0bjective:TodeterminethepreparationmethodsofgenomieDNA Methods:Weusedthreediffer— ev,tways TheyaTeHydmxybez~e—chloroform methodandimprovedsaltoutme~hod by~kichger~omieDNA can beisolatedfrom humanbloodsamplesandmouthmulx)usmembranemethodbywhichgenomicD A wasextracted from huecomuemalepithelialcells AlldtheyieldsandqualitiesoftheRenomicDNAgainedbythethrc~eways~vere compared.Results:Every ddandqua~tyofgenomicDNA m thedemandsofPeR andgenotyping Conclusions: Improvedsaltoutmethodisacomparativelysimple,economicalandrapidway,anditismoresuitableforcfinical geneticdiagnosis,whilemouthmucocousmembranemethodisspeciallysuitableforyoungchildrenandgne ealogical researches Keywords:D JA preparation;Saltout:EpithelialGelI 随着分子生物学技术 的不断发展 ,以PCR为基 (PH76),5raM MgCI2,10mM NaCI;TEBuffer(TE 础的基因分型和基因诊断技术被广泛应用于各个领 缓冲液):lOmM Tris—HCI,0 1mM EDTA (PH 域。因此 ,PCR反应的模板 即基因组 DNA 的制备 8.0);TA~Buffer(TAE 电泳缓冲液):0.04MTris 成为一个重要的步骤。本文分别对三种方法即酚一 一 乙酸 ,0.001M EDTA (PH80);TKM 液 :0.1M 氯仿法、改 良盐析法及口腔粘膜法制备基 因组 DNA Trjs—HClP‘H 7 6),0.01M KCI,2mM EDTA, 进行 了研究探讨。 4mM MgC[2;TritonX一100(分析纯);饱和酚 :用市 售酚 自制。 1 材料和方法

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