大肠杆菌原核表达载体pSBET_His的构建.pdfVIP

( ) 安徽农业科学 ,Journal of Anhui Agri . Sci . 2007 ,35 27 :8443 ,8446 　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑 　孙红忠 　责任校对 　李菲菲 大肠杆菌原核表达载体 pSBETHis 的构建 1 ,2 1 1 ( ) 陈正斌 , 谭仲夏 , 秦西云 　 1. 云南省烟草科学研究所 ,云南玉溪 653100 ;2 . 云南农业大学植物保护学院 ,云南昆明 650201 摘要　为了构建原核表达载体p SBETHis 。p SBETa 质粒经 Xba I 和 B amH I 限制性内切酶双酶切 ,获得原核表达载体的骨架 。以p ET28a ( + ) 为模板 ,通过高保真 PCR 法应用 T7 promoter 引物和 T7 terminator 引物对p ET28a ( + ) 载体 T7 表达区域进行扩增 ,PCR 产物电泳纯化后 α 经双酶切和纯化获得 138 bp 含 HisTag 序列的片段 。将p SBET 原核表达载体骨架和含有 HisTag 序列的片段进行连接后转入DH5 感受 态细胞中,经菌落 PCR 及酶切筛选构建p SBETHis 。成功构建了p SBETHis 原核表达载体 。应用该载体表达的蛋白质 ,可采用镍离子亲 和层析法进行纯化 。该研究为应用p SBETHis 载体进行烟草丛顶病毒ORF4 的原核表达研究奠定了基础 。 关键词　原核表达载体 ;p SBETHis ;构建 ( ) 中图分类号　Q936 　　文献标识码　A 　　文章编号　0517 - 6611 2007 27 - 08443 - 01 Study on the Construction of Prokaryotic Expression Vector pSBETHis in E . coli ( ) CHEN Zhengbin et al 　 Yunnan Institute of Tobacco Science , Yuxi , Yunnan 653100 Abstract 　The aim of the research was to construct prokaryotic expression vector p SBETHis. Double restrictionenzyme digestion was conducted on p SBE Ta plasmid by restriction endonucleases Xba I and B am H I to obtain the framework of the prokaryotic expression vector . With p ET28a ( + ) as template , T7 expression region of p ET28a ( + ) vector was amplified with T7 promoter primer and T7 terminator premier by high fidelity PCR. Double restrictionen zyme digestion and purification of PCR products were conducted to obtain the fragment of 138 bp that contained HisTag se