实验_盐酸小蘖碱的提取分离与鉴定.docVIP

实验 盐酸小蘖碱的提取分离与鉴定 实验目的与要求 1．学习生物碱的初步提取分离方法。 2．掌握利用柱层析分离纯化、薄层层析鉴定药用植物成分的方法。 基本原理 生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,是许多中草药中的有效成分。它们是人类对植物研究得最早最多的一类有效成分,现已分离出有六千余种。这些生物碱在植物体内一般均与有机酸或无机酸结合成盐而存在,只有弱碱性生物碱往往呈游离状态,还有一些是与糖结合成苷而存在。小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨科黄连（Coptis chinensis Fran）和芸香科黄柏(Phellodendron amurense Rup.)等植物中提出的一种黄色生物碱。黄连属植物的根茎、须根、叶中等都含有小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马亭等生物碱[1],我国黄连药材产量占世界第一位。现已发现，唐松草属（Thalictrum）、小檗科的小檗属(Berberis L.)、十大功劳属(Mahomia Nuff)及防己科的天仙藤属（Fibraurea）等都可作为提取小檗碱的资源植物。 本实验即是用小檗属植物三颗针(Berberis julianae schneid.)或黄连属黄连作为提取小檗碱的原料; 化合物 R R1 R2 R3 R4 小檗碱 －O－CH2－O－ OCH3 OCH3 H 甲基黄连碱 －O－CH2－O－ －O－CH2－O－ CH3 黄连碱 －O－CH2－O－ －O－CH2－O－ H 掌叶防己碱 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 H 药根碱 OH OCH3 OCH3 OCH3 H 古伦胺碱 OCH3 OH OCH3 OCH3 H 黄连类生物碱结构 三颗针及黄连中均含有小檗碱(分别为1%,5.1%)以及巴马亭(掌叶防已碱,Palamtine)、药根碱(Jatrorrhicine)等,它们均有明显的抗炎作用。 小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145℃(乙醚),微溶于水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。溶解度分别为:小檗碱,1∶２０（冷水）,1∶100(冷乙醇);盐酸盐,1∶500(冷水);硫酸盐,1∶30(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。 仪器与试剂 仪器：层析柱、研钵、烧杯、硅胶薄层板、滤纸、抽滤装置、紫外灯、层析缸等 试剂与样品：三颗针根粉(或黄连根粉),0.5%硫酸，石英砂，脱脂棉，石灰乳，10%盐酸，浓盐酸，氧化铝，95%乙醇，无水乙醇，10％氢氧化钠溶液,滤纸，硅胶，氯仿-氨-甲醇(30∶1∶8),氯仿-乙醇-0.1mol.L－1 盐酸 (1∶1∶1，下层) 实验内容与步骤 1 小檗碱粗品的制备 方法一 取三颗针的根粗粉(过20目筛)20g,以0.5%硫酸适量润湿,拌以50g石英砂,混匀,装入底部塞有脱脂棉的层析柱中,关闭活塞。加入适量0.5%硫酸,使之浸没药面,浸泡一昼夜。逐渐加入0.5%硫酸即开始渗漉,约收集200 mL溶液。再用150 mL左右0.5%硫酸浸泡一天并渗滤。收集液用石灰乳中和多余硫酸,调pH＝7,滤除沉淀,向滤液中加5%量食盐至饱和,并以10%盐酸调至pH2-3,静置(过夜),滤出沉淀。并用少量水洗涤。向沉淀中加适量热水溶解,用石灰乳调节pH8.5-9.8,趁热滤除杂质,滤液在搅拌下加浓盐酸至pH2,冷却静置,滤取析出的沉淀,水洗涤至中性,抽干。50℃以下干燥,即为盐酸小檗碱粗品(成品)。 方法二[2] 取三颗针的根粗粉(过20目筛)20g,置于500 mL烧杯中，加入8倍量0.5%硫酸水溶液使之浸没药面,浸泡24h，用脱脂棉过滤。滤液加石灰乳中和多余硫酸,调pH＝12,静置30 min，滤除沉淀,滤液用10%盐酸调至pH2-3,再向滤液中加10%（W/V）量食盐[3],搅拌使完全溶解后，继续搅拌至溶液出现为混浊现象为止，静置(过夜),滤出沉淀。并用少量水洗涤至中性,抽干。50℃以下真空干燥,即为盐酸小檗碱粗品。 盐酸小檗碱精制 方法二所得小檗碱还需精制。取所得粗品(未干燥)放入20倍量沸水中，搅拌溶解后，继续加热数分钟，趁热过滤[4]。滤液滴加一滴浓盐酸，静置(过夜),滤取结晶，用蒸馏水洗数次,抽干，50℃以下真空干燥，即为精制盐酸小檗碱 氧化铝柱层析分离纯化盐酸小檗碱[5] a 氧化铝层析柱制备: 取一支2.0cm×30cm层析柱,柱底覆盖少许脱脂棉,柱内加入一定体积95%乙醇,打开活塞,让溶液慢慢流出。此时将已搅拌混均的氧化铝95%乙醇悬液(层析氧化铝120-140目,25-30g)不断加入层析柱内,至加完后,轻敲柱体,使各部分氧化铝均匀紧密一致。待氧化铝沉降稳定(表面应平整),表