盐酸克伦特罗残留酶联免疫吸附（ELISA）检测方法的研究.pdfVIP

维普资讯 墨盔锄 盐酸克伦特罗残留酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的研究 陈存社 吕会 田 (北京工商大学化学与环境工程学院，北京 ，100037) 摘 要 建立 了间接 ELISA检测盐酸克伦特罗的方法，并对其参数进行 了分析计算。在该检测方法 中，抗盐酸 克伦特罗(CL)抗体最适稀释度为 1：1000，羊抗兔酶联抗体(HRP—IgG)的最适稀释度为 1：1500。该检测方法 的 检测灵敏度可达 0．1046／zgL／，生物检测限为 1．452／zgL／，线性检测范围为7．26-90．75／zgL／。 关键词 盐酸克伦特罗，酶联免疫吸附检测(ELISA)，检测方法 盐酸克伦特罗 (clenbuterolhydrochloride，CL)， 1．1．1 实验试剂 异名克喘素、氨哮素 ，俗名 “瘦肉精”，化学名为 a一[(叔 盐酸克伦特罗 (FW313．7，Sigma公司产 品)，牛 丁胺基)甲基]一4一氨基一3，5一二氯苯 甲醇盐酸盐。临床 血清蛋 白(BSA，Mw 67000，Sigma产品)，鸡 卵球蛋 上用于治疗哮喘和支气管痉挛 的药物。当其应用剂 白(OVA，欣经科公司产品)，HRP一羊抗 鼠 IgG(北京 量达治疗剂量的5～10倍[即大于 lg／(kg·d)]时，CL 欣经科生物技术有限公司)，四 甲基联苯胺 (TMB，北 可增强肌 肉发育，降低脂肪沉积 ，因此又称 “瘦 肉 京欣经科生物技术有 限公 司)，浓 HC1(36．38％)、 精”，作为一种非法饲料添加剂被许 多专业饲养户和 H202、NaNOz、 (NH4)2S04、NaOH、Na2HPO4、 饲料加工企业所使用 ，已经成为了重大的食品安全问 NaH2PO4均为 国产分析纯产 品，实验用水为双蒸去 题 …1。 离子水。 CL屡禁不止 的原因之一就是 目前 的检测方法 1．1．2 实验仪 器 — — 高效液相色谱一质谱联用法 (HPLC—MS)和气相 台式 高速冷冻离 心机 (Hettich公 司)，Model 色谱一质谱联用法 (GC—MS)不能适应市场监督需要 的 3550酶标仪 (BIO—RAD公司)。 快速 、简便 、价廉要求 。若想彻底禁止 CL的非法使 1．2 实验方法 用 ，就必须加快快速检测方法的研究。酶联免疫吸附 1．2．1 免疫血清的制备 检测法 (ELISA)是当前盐酸克伦特罗残 留检测方法 以CL重氮化后分别连接到牛血清蛋 白(BSA) 中最为常用的一种方法 ，具有简便、快速 、灵敏 、高特 异性等优点_2J。德 、美等 国都 已将 ELISA用于 CL 和卵清蛋 白(OVA)上制得免疫原 BSA—CL和 OVA— 残留检测中，并已有 ELISA商品化试剂盒问世 ，大大 CL_3J。以BSA—CL为免疫抗原 ，采用背部皮下多点 加强和方便 了动物性食 品中CL残留的检测。而 目 (6～10点)注射免疫健康 日本大耳 白兔获得免疫血 前我国使用的试剂盒大都从 国外进 口，价格 昂贵 ，不 清 ，加入 0．02％叠氮化钠分装 ，一70C保存待用通过