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真菌DNA的快速提取及检测：
一、具体步骤：
1、菌丝体材料：刮取斜面培养基上的少量菌丝于1.5ml的离心管中；子实体材料：直接取少量子实
体于1.5ml的离心管中，分别对其进行研磨至糊状，
①
2、加入0.5ml的抽提缓冲液 后，漩涡震荡5min后，65℃水浴10min，
②
3、加入200μl的乙酸铵溶液 ，冰中放置10min后，12000r/min离心10min，
4、取上层水相于另一个离心管中，加入0.6倍体积的冰预冷的异丙醇，颠倒混均，-20℃放置20min
5、12000r/min离心10min，弃去上清，用70%的乙醇洗涤沉淀2次，晾干，
6、溶于30μlTE缓冲液，并加入2μlRNaseA于37℃水浴10min。
7、完全溶解沉淀后，-20℃保存。
① 0.2 mol/L Tris-HCl(pH 8.5),0.25mol/L NaCl,25mmol/L EDTA,2%SDS
② 100 ml 配制方法：
1. 称量77.1 g乙酸铵（醋酸铵）置于100~200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。
二、PCR扩增条件：
试 剂 用 量/μl
ddHO2 26.75 95℃ 5min 预变性
10×PCR Buffer 5
dNTP 4 95℃ 30s
Mg2+ 4 58℃ 1min
30 cycle
ITS86 4 72℃ 30s
ITS4 4 72℃ 10min
DNA模板 2
Taq酶 0.25 4℃ 5min
合 计 50
三、连接与转化
四、测序
五、序列分析
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