碱性脂肪酶同工酶的分离纯化.pdfVIP

维普资讯 ⑦ 一 第 19卷第 1期 无 锡 轻 工 大 学 学 报 Vol19，No．1 2000年 1月 JournalofWuxiUniversityofLightIndustry Jan ，2000 文章蝻号 ：1009—038X(2000J01—0009—05 碱性脂肪酶同工酶的分离纯化 丁 ，西 旦 堡 ，黄 ：，孙崇荣-，皇 V 跏 (1．复旦大学生 ，上海 、-2．无锡轻工大学中央葫而 苏无锈214036) 摘 要：对经疏水层析(PhenyISephamseCL．4L)和阴离子交换层析(DEAE-FastFlow)寻部分纯 化 的样品．采用制备型聚丙烯酰胺凝胶 电泳进一步将其分离纯化 ，获得 了PG37碱性脂肪酶 的3种 同I酶 LipaseI、Lipase Ⅱ和 Lip~elH．用 SDS-聚丙烯酰胺 凝胶 电泳和 SephadexG-150凝胶 色谱 法分别测得 同工酶 的相对分子质量为 27500和 29000．测定 了LipaseI的等 电点为 5．4．动力学 常数 K 和V 分别为 4．54g／dL和 5．56~mol／(min。ug)． 关键词：毡丝盥照壁；坌受兰 ；．叵三堕；堡型 堂 中图分类号：Q556 文献标识码 ： A PurificationofIsoenzymesfrom PG37AlkalineLipase WUMin-chen．HUANGWei．da，SUNChong．rong．wuxj8Ⅱ-zh丑ng2 (1．DepartmentofBiochemistry，FudanUniversity，Shanghai200433； 2．CentralResearchInstitute， WuxiUinversltyof LightIndustry．Wuxi214036) Abstract：Parti~ purifiedlipasesamplebyPhenylSepharo~eCL4B andDEAE-FastFlow from PG37 Was separatedfurtherhypreparativepofyac叫amidegelelectrophoresis．Threeisoer~ymes(LipaseI、 IIand~1)bandswereobfaindandhadsamemolecularweightof27500determinedbySDS-polyacry— lamidegelelectrophoresisor29000bySephadex0 l5Ogelfiltration．Theseresultsindicatedthatli- pasefunctionsasamonomer．na dthreeisoenzymeshadidenticaImoleculeandexists8Dm differencein electricchargeorglycosylation．TheLipaseIshowedisoelectr~cpointatpit5．4．TheKmnad 缸 0f thelipase1were 4．54s／dLand5．56u,mo／／(min·g)respectively，asdeterminedbyLineweaver- Burk plot． Keywords：alkdinelipase；pur ification；isoenzyme；kineticsof enzyme 近几十年来，已分离提纯 了哺乳动物n，zI、细 究，从氨基酸或核苷酸的排列