24第24章 病毒感染的检查方法与防治原则.ppt

（二）病毒成分检测 病毒蛋白抗原检测 EIA、FIA、Wb 病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序技术 （三）血清学诊断 中和试验 血凝抑制试验 补体结合试验 凝胶免疫扩散试验 特异性IgM 抗体检测 血清学诊断的用途 分离病毒为时已晚 无法分离或难以分离的病毒 证实分离病毒的临床意义 血清流行病学调查 原理：病毒＋中和抗体 病毒失去感染性 1.中和试验 neutralizing test 检测血清中抗体的水平 鉴定未知病毒 对病毒进行半定量 较少用于临床诊断，用于人群 免疫情况的调查 原理：病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞 不凝集 带血凝素病毒感染辅助诊断 鉴定病毒型和亚型 2.血凝抑制试验 Hemagglutination inhibition test 3.补体结合试验 Complement fixation test 原理：用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体 特异性低，抗体出现早，消失快近期感染指标 第二节 病毒感染的特异性预防 人工主动免疫 人工被动免疫 1.人工主动免疫 灭活疫苗 减毒活疫苗 亚单位疫苗 基因工程疫苗 重组载体疫苗 核酸疫苗 2.人工被动免疫 免疫球蛋白 血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂 细胞因子 逆转录病毒复制示意图 第三节 病毒感染的治疗 第三节 病毒感染的治疗 抗病毒化制剂 干扰素和干扰素诱生剂 中草药 新抗生素类 治疗性疫苗 治疗性抗体 基因治疗剂 * 多聚肌苷酸和多聚胞啶酸 * 医学微生物学 病毒感染的 检查方法与防治原则 重点及难点 标本的采集和送检 病毒分离培养方法 病毒感染的血清学诊断方法 人工主动免疫和被动免疫及其常用制剂 第一节 病毒感染的检查方法 标本的采集与送检 病毒的分离与鉴定 病毒感染的诊断 一、标本的采集与送检 采集急性期标本 使用抗生素 冷藏保存，快速送检 采集双份血清 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离培养 动物接种 鸡胚培养 细胞培养 动物接种 应用：无敏感细胞培养的病毒 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：要有饲养条件，费用高，有潜伏病毒， 对许多人类病毒不敏感 动物接种 鸡胚培养 优点：对多种病毒敏感，条件易控制，操作 简单，成本较低 缺点：无病毒增殖指标；有些病毒可致鸡胚 死亡 鸡胚接种部位示意图 单层细胞 悬浮细胞 根据细胞生长情况 原代细胞 二倍体细胞 传代细胞系 根据细胞来源、 染色体特征及 传代次数 细胞培养 1. 原代细胞 primary cells 对多种病毒敏感 来源困难, 获取成本高 可携带潜伏病毒 2. 二倍体细胞 diploid cells 对多种病毒敏感 不带病毒，无致癌潜能 用于病毒疫苗生产 3. 传代细胞 continuous cell 对多种病毒敏感 繁殖能力高，传代时间长 不能用于病毒疫苗生产 病毒在培养细胞中的增殖指征: 细胞病变 红细胞吸附 病毒干扰作用 细胞代谢的改变 细胞病变效应 cytopathic effect, CPE 正常细胞 细胞病变早期 细胞病变晚期 红细胞吸附 hemadsorption 带有血凝素的病毒感染细胞后，能与脊椎动物红细胞结合 鸡红细胞吸附于流感病毒感染的细胞 风疹病毒 人胚肾细胞CPE(－) 埃可病毒 人胚肾细胞CPE(＋) 人胚肾细胞 埃可病毒 CPE(-) CPE(+) 待检标本 风疹病毒(-) 风疹病毒(+) 病毒干扰作用 viral interference 某些病毒不引起CPE,但可干扰感染同一细胞另一病毒增殖，抑制该病毒的CPE。 （二）病毒的鉴定 形态学鉴定 血清学鉴定 分子生物学鉴定 1.形态学鉴定 光学显微镜 巨细胞病毒包涵体 透射电镜 SARS病毒 Ab 方法包括 Ag 2.血清学鉴定 用已知特异性抗体对病毒进行种、型和亚型的鉴定 ELISA 中和试验 血凝抑制试验 补体结合试验 方法包括 3.分子生物学方法鉴定 对病毒的蛋白抗原、核算进行检测 蛋白印迹技术 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序 新病毒的鉴定 核酸类型的测定 理化性状的检测 基因测序和生物对比 （三）病毒数量与感染性测定 50%组织细胞感染量 红细胞凝集实验 空斑形成试验 1.50％组织细胞感染量 50％ tissue culture infectious dose, TCID50 原理：测定50%细胞出现CPE的最小病毒量 以CPE作指标，判断病毒感染性和毒力 测定活病毒数量 ++++ ++++ +++ ++