初始污染菌检查20120330.ppt

初始污染菌检查 凌真 jennal@126.com Tel扬州药品检验所 药理室 2012-3-30 生物学检查 初始污染菌检查 空气中细菌总数检测方法 物体表明和生产人员手细菌总数检测方法 初始污染菌检测 初始污染菌检测 目的：保证灭菌的效果，确定灭菌剂量，监控灭菌过程的有效性。 引用标准： GB7918.2 化妆品微生物标准检验方法 细菌总数测定 GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准 中华人民共和国药典2010版 附录 微生物限度检查法 GB7918.2 细菌总数指1g或1ml化妆品（检品）中所含的活菌数量，测定细菌总数可用来判明化妆品（检品）被细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者（生产工人手细菌总数）的卫生状况，是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。 GB15980-1995 规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。对一次性使用医疗用品（包括灭菌和消毒的一次性使用医疗用品）生产企业中生产、装配、包装车间（空气中细菌总数检查方法）等生产过程和生产工人手提出卫生要求的质量控制。 检测环境 和检验量 在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行。洁净区设置可在微生物室操作 各类产品每批随机抽样10件样品（10个包装） 方法主要步骤 采样 初始污染菌检测 初始污染菌检测 检验方法 将每样取5份平行样（取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1000，……） 初始污染菌检测 结果计算公式： 平均菌落数×稀释倍数菌数 菌数/每件次（或g） =——————————————————— 件次或重量（g） 注意事项： 供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。 应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。 产品初始污染菌数限值： 灭菌产品管道类内腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次，非管道类≤100cfu/件次，敷料类≤100cfu/g；消毒产品≤1000cfu/件次或重量（g） 初始污染菌检测 细 菌 计 数 细菌计数 先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏（可辅助菌落计数器）记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数（每个稀释度的5个平板值，相加后除以5）。 若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数，若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。 菌落特征 ⑴ 形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、 淡黄色（如果培养基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑试剂)，菌落为红色） ⑵ 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。 ⑶ 大小差异很大。 菌落计数基本规则 空气中细菌总数检测方法 测定空气中动态下细菌总数。 采用平板暴露法：车间在30m2以上者，于东、西、南、北（距墙1m处）、中五点；小于30m2者，于一条对角线里、中、外三点，高度均在1.5m处采样，将普通营养琼脂平板（9cm直径）按上述采样点和高度布放，暴露15min后立即关盖，于37℃温箱培养24h后观察后果，求出5个或3个采样点的平均菌数 计算公式 菌数/m3= 式中： A——平板面积，cm2； T——平板暴露时间，min； N——平均菌落数。 标准限值：灭菌和消毒产品分别≤500和≤2000cfu/m3 物体表面和生产人员手细菌总数检测方法 采样方法: 将内径为5cm×5cm的灭菌规格板，放在被检物体表面，根据物体表面积大小，采平行样1～4个，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次（往返计为1次），将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的采样管中。 对生产人员手采样：被检人五指并拢，将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在右手指曲面，从指尖、甲沟至指根处往返涂抹10次后，将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的试管中。 检验方法和结果计算 将每个采样管震打80次，混匀，10倍递减稀释，对每个稀释度(取3个稀释度)，分别取1ml放于灭菌平皿内，每个稀释度倾注2块平板），用普通琼脂培养基