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DNA
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DDNNAA纯化方法
DNA
DNA
DDNNAA纯化方法
黄宝福
2012-2-16
DNA提取步骤
细胞破碎
提
取
纯化
DNA提取步骤
细胞破碎 机械法：低渗裂解、超声裂解、微波
裂解、冻融裂解、颗粒破碎
pH
化学法：在一定的 环境下，加入表
面活性剂或强离子剂
提 （CTAB,SDS），使细胞裂解
取 酶法：加入溶菌酶或蛋白酶，使细胞
裂解
纯化
DNA提取步骤
-
细胞破碎 沉淀法：酚氯仿抽提法，异丙醇沉淀法
介质吸附：
pH
硅基质 高盐低 结合核酸，低盐高
pH洗脱
提
pH
阴离子交换树脂：低盐高 结合核
取
pH
酸，高盐低 洗脱
磁珠：免疫、表面修饰
纯化 梯度离心：双链DNA、单链DNA、RNA
和蛋白质具有不同的密度，经密度梯度离
心，可形成不同密度的纯样品区带
DNA提取步骤
细胞破碎
提
取
沉淀法：乙醇残留的去除
纯化
吸附法：非DNA组分的去除和
洗脱
/ DNA
酚氯仿提取
: :
酚氯仿异戊醇
10min
DNA溶液 混匀 离心 水相
:
氯仿异戊醇
5min 10～15min
弃上清
洗涤 室温干燥 混匀
弃上清
TE缓冲液溶解 10min 离心
离心 5min
-20℃ 混匀 混匀 水相
30min
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