液相色谱实验课_理论部分.ppt

色谱法分类 色谱法按分离机理分类 色谱法按固定相的形状分类 离子交换色谱法 固定相——离子交换剂，利用不同待测离子对固定相亲和力的差别来实现分离的液相色谱法。 分析对象——主要是离子型化合物。 离子交换原理 3.5 HPLC的固定相与流动相 3.5.1固定相 以承受高能分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.0×108～1.0×109Pa，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。在二氧化硅表面键合各种官能团，就是键合固定相，可扩大应用范围，它是目前最广泛使用的一种固定相。 硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯基苯交联而成。可承受压力上限为3.5×108Pa。 按孔隙深度分类：表面多孔型和全多孔型固定相两类。 3.5.2 表面多孔型固定相 基体是实心玻璃珠，在玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化铝、离子交换剂、分子筛、聚酸胺等。表面活性材料为硅胶的固定相如国外的Zpax，Corasil I和II，Vydac，Pellosil以及上海试剂一厂的薄壳玻璃珠等；表面活性材料为氧化铝的固定相，如Pellumina；为聚酰胺的，如Pellion。这类固定相的多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅速、柱效亦高；颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达平衡，较适合做常规分析。 由于多孔层厚度薄，最大允许量受限制。 3.5.3 全多孔型固定相 由直径为10 nm的硅胶微粒凝聚而成。如国外的Porasil，Zobbex、Lichrosorb系列，上海试剂一厂的堆积硅珠，青岛海洋化工厂的YWG系列，天津试剂二厂的DG系列等。也可由氧化铝微粒凝聚成全多孔型固定相，如国外的Lichrosorb ALOXT。 这类固定相由于颗粒很细（5～10 ?m），孔仍然较浅，传质速率快，易实现高效、高速。特别适合复杂混合物分离及痕量分析。 两类固定相性能比较 HETP：理论塔板高 3.5.4 流动相 对流动相溶剂的要求是： （1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性。 （2）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应选用检测器波长大于溶剂的紫外截止波长（UVCW）。当小于UVCW的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量。下页表列出了常用溶剂的紫外截止波长。 对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。 Data of UV cutoff wavelengths (UVCW) of some common solvents 187 205 190 330 212 UVCW/ nm H2O CH3OH CH3CN acetone THF Solvent 233 245 210 265 380 190 UVCW/ nm CCl2 CCl3 benzene CCl4 CS2 n-hexane Solvent （3）高纯度。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”；痕量杂质使截止波长值增加50～I00 nm。 （4）化学稳定性好。不与样品发生反应或聚合。 (5) 低粘度。高粘度溶剂增高压力。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙腈等。粘度过低的溶剂（戊烷、乙醚等）易形成气泡，也不宜采用。 3.6 HPLC的主要类型与选择 3.6.1 液一液分配色谱法（LLPC） 在液-液色谱中，流动相和固定相都是液体，能适用于各种样品类型的分离和分析（极性的和非极性的、水溶性和油溶性的、离子型的和非离子型的化合物）。 （1）分离原理 液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分。 （2）固定相 由于液液色谱中流动相参与选择竞争，因此，对固定相选择较简单。只需使用几种极性不同的固定液即可解决分离问题。例如，最常用的强极性固定液β,β?一氧二丙腈，中等极性的聚乙二醇，非极性的角鲨烷等。 为了更好解决固定液在载体上流失问题。产生了化学键合固定相。它是将各种不同有机基团通过化学反应键合到载体表面的一种方法。代替了固定液的机械涂渍，它的出现是液相色谱法的一个重大突破。它是目前应用最广泛的一种固定相。约有3/4以上的分离分析是在化学键合固定相上进行的。 （3 ）流动相 在液液色谱中为了避免固定液的流失。对流动相的一个基本要求是流动相与固定