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凝血实验 一 血浆凝血酶原时间测定(PT) 实验原理: 待测血浆中加入过量的含有钙离子的组织凝血活酶,血浆在组织因子存在时激活凝血因子X,Xa使凝血酶原转变为凝血酶,凝血酶使可溶性的纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白,测定血浆凝固所需要的时间,即为血浆凝血酶原时间。PT是外源性凝血系统常用的筛检试验。 方法 取37℃孵育的待测血浆0.1ml,加入37℃预温的PT试剂0.2ml,混匀,立即计时,不时地倾斜试管至液体流动缓慢趋于停止时,终止计时,记录所需时间。 参考值 10-14s。 二 活化部分凝血活酶时间测定 (APTT) 实验原理 待检血浆加入部分凝血活酶溶液,在钙离子作用下纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白,测定凝固所需时间,即为待测血浆活化部分凝血活酶时间。APTT是内源性凝血系统常用的筛检试验。 方法 取待测血浆0.1ml,加入37℃预温的APTT试剂0.1ml,混匀, 37℃孵育5min。加入37℃预温0.025mol/L CaCl2溶液0.1ml,混匀,并立即计时,记录时间。 参考值 25-45s。 三 血浆凝血酶时间测定(T T) 实验原理 待测血浆加入适量的凝血酶溶液,纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白,测定凝固所需时间,即为待测血浆凝血酶时间。TT是检查受试者血浆纤维蛋白原转变为纤维蛋白能力的筛检试验。 实验方法 取37℃预温待测得血浆0.2ml,加入TT试剂0.2ml,混匀,记录凝固时间。 参考值 10-16s 四 血浆D-二聚体检测(DD) 实验原理 以抗D-二聚体单克隆抗体标记乳胶颗粒,将标记的乳胶颗粒与待测血浆混合。当血浆中D-二聚体含量大于0.5ug/ml时,标记的乳胶颗粒发生聚集,呈现阳性反应。 方法 1. 自冰箱中取出DD试剂盒,室温平衡30min。 2. 取15ul DD试剂,置于测试板的圆圈内,再加入15ul待测血浆,用搅拌棒混匀,轻轻摇动测试板5min,然后在较强光线下肉眼观察结果。出现明显均一的凝集颗粒者为阳性,无凝集颗粒者为阴性。 3.半定量:将待测血浆用缓冲液作1:2等系列倍比稀释,方法同2。 正常值 D-Dimer阴性(D-Dimer0.5ug/ml) 静脉采血,制备血浆: 静脉血置于含有1/10体积的枸橼酸钠抗凝(1份抗凝液+9份全血)的塑料管中,轻轻颠倒混匀,3000rpm离心15min,收集上层血浆。
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