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中国试剂网 3.15.1.16 电泳和Western 转印的常见问题 表1 Common problems for electrophoresis and western bloting 问 题 可能原因 建议解决方法 推荐电压条件下电泳缓冲液过稀。 配制新鲜缓冲液，使用1X 稀释液。 电泳时间过长。 推荐电压条件下电泳缓冲液过稀。 配制新鲜缓冲液，使用1X 稀释液。 电流过高，热量 过大。 推荐电压条件下接触不良。 在电泳前移除胶盒底部的封条；确认缓 电流过低或无电 冲液没过加样孔；检查buffer core 上导 流。 线连接。 蛋白带型条状上样过量。 降低蛋白上样量。通过透析或凝胶过滤 （streak ） 样品中盐浓度过高。降低样品中的盐浓度。 样品沉淀。 加大样品中SDS 的浓度。 样品中的污染，如脂 离心或过滤样品以除去特定污染。 类或DNA 复合物。 制胶不佳。 确保灌胶均匀，一次完成。 条带模糊。 蛋白样品部分变性。完全变性蛋白。 蛋白样品部分还原。确保加入足够量的DTT 或β巯基乙醇。 观察前面的指示剂染料，掌握恰当的电 电泳时间过长。 泳时间。 哑铃形条带或上样体积过大导致使用恰当的上样体积。如果样品过稀， 微笑条带。 不完全堆积。 使用超滤浓缩。 电泳过程中电场不 如果蛋白浓度已知，上样时确保对称。 均匀。 分离胶表面不平。 在制胶时使分离胶表面水平。 凝胶过期。 在指定的失效期前使用凝胶。