硫蛋白改善糖尿病大鼠肾脏氧化应激.pdfVIP

锌诱导肾脏I型金属硫蛋白改善糖尿病大鼠 肾脏氧化应激 ofRenalOxidativeStress InductionofRenal Improvement Through Zinc inDiabetic 、Metallothionein Synthesisby Supplementation Rats Nephropathic 杨勤，张晓林，孙迪，杨婷，谢汝佳，方丽 (贵阳医学院病理生理学教研室，贵阳550004) YANG Xiao—lin，SUNDi，YANG Li Qin，ZHANG Ting，XIERu-jia，FANG Medical 550004,China) (DepartmentofPathophysiology，GuiyangCollege，Guiyang 13．7 锌是金属硫蛋白(metallothionein，MTs)mmol／L，且尿糖阳性的认为糖尿病模型成 基因表达的诱导因子…。MTs是富含半胱氨酸、可 诱导的、多功能、小分子量金属结合蛋白，在抗 饮用含硫酸锌5mg／kg的自来水，N及DN组饮用 氧化、维持微量元素自稳态、重金属解毒等方面 自来水，共12w。实验期间动物自由进食、不用胰 有重要作用旧。。本研究以口服硫酸锌诱导糖尿病 岛素及其它降糖药物。 大鼠肾脏MT一1基因表达，探讨其对糖尿病肾病的 1．3观察指标及方法 保护作用。 1．3．1血、尿及肾脏生化检测：实验结束时大鼠 称重，代谢笼收集24h尿，考马斯亮兰法测尿蛋 1材料与方法 白。取血，分离血清，氧化酶法测血糖、血肌酐。 1．1试剂 取肾，称肾重，一侧肾用于分子生物学和生化检 链脲菌素(STZ；Sigma)；兔抗鼠单克隆MT-1测。取肾皮质组织100mg，制备1％匀浆，严格按试 抗体(SantaCruz)；血糖、肌酐、尿蛋白检测剂盒说明书操作，钡IJMDA水平及总SOD活性。 试剂盒(北京迈克；RNA纯化试剂盒、SYBR 1．3．2肾脏病理学检查：另一侧肾用4％中性甲醛 green、 MuLV逆转录酶、RNase、Trizol、dNTP、TaqDNA固定，石蜡包埋切片，HE和PAS染色，镜下观察肾 聚合酶等主要试剂(AppliedBiosystems)；MDA、小球、肾小管、肾间质的病变，并对PAS染色切片 SOD检测试剂盒(南京建成生物工程研究所) 1．2动物分组及动物模型复制 例测量5个肾小球)。 1．3．3MT一1 雄性Wistar大鼠50只，体重180～2009，上海mRNA表达水平测定：取肾皮质组织 实验动物中心提供。适应性饲养1w后，将动物随 100 机分成：正常(N，／7=10)、糖尿病(DN，／7=15) min) 法测mRNA水平。逆转录条件为：25℃10 正常加锌(N+Zn，17=10)