细胞内游离钙检测方法进展.pdfVIP

国外医学临床生物化学与检验学分册 　2001 年第 22 卷第 2 期 7 1 细胞内游离钙检测方法进展 赵彩霞 　郑延松 综述 　田　敏 审校 (石家庄市正定县 256 医院内二科 　050800) 　　摘 　要 　许多损伤因素诸如氧化应激 、缺血与再灌注等都可导致细胞内游离钙浓度的变化 ,而游离钙浓度的变化又与细胞的 功能、信号转导乃至细胞的凋亡有密不可分的联系 ,因此 ,研究如何检测细胞内游离钙浓度显得尤为重要 。本文就 目前常见的细 胞内钙离子测定方法加以叙述 。 关键词 :细胞内游离钙 ;测定方法 ;荧光染料 ;激光共聚焦显微镜 ( ) 中图分类号 :R4461 　　　　　　　　文献标识码 :A 　　　　　　　　文章编号 2001 　　细胞内的钙以三种方式存在 : ( 1) 牢固地结合在细胞结构 离钙平衡 ,因此没有这个因素对测量的干扰 。但该方法反应速 ( ) 2 + 成分或大分子上 。 2 以离子形式 自由状态存在于细胞中 , 即 度慢而无法测定细胞[ Ca ]I 快速变化 ,而且电极刺穿细胞将 ( ) 细胞内游离钙 。 3 与高容量低亲和的钙结合蛋白松弛的结合 损害质膜引起渗漏 ; 同时也不适用于太小的细胞 。 而存于质网、线粒体等胞内钙库中 , 当信号传来时能将钙释放 2 + 4 　放射示踪法 ( ) 入胞浆中成为游离钙 。正常细胞 内游离钙浓度 [ Ca ]I 为 50150nmol/ L ,与胞外钙离子浓度相差近 10 000 倍 。然而就是 　　对单位碱金属离子利用放射性同位素示踪可测量其单向 这极少量的游离钙却对细胞功能的调节起着极其重要的作用 。 流量 ,进而分析其通过细胞膜转运的速度及浓度大小 ,对于直 病理状态下细胞内钙超载将造成一系列代谢紊乱 ,直至细胞坏 径较大的细胞该方法可定性 、定量地分析细胞 内外浓度的变 死或凋亡 ;所以近年来大量的研究都涉及到细胞内游离钙的变 化 。目前主要用于测定跨膜 Ca2 + 流动及代谢动力学 ,但对静 化 。最初人们一直难 以找到好的方法测定[ Ca2 + ]I ,这主要是 息[ Ca2 + ]I 测定不大理想 ,且实验过程繁琐 ,较易受干扰因素影 由于细胞内游离钙浓度很低 ;且没有合适的探针既可导入细胞 响 ,技术复杂 ,需要特定的同位素测定仪 。 和 Ca2 + 很好地结合又不损伤细胞 。第一次测定活细胞[ Ca2 + ]I ( ) 2 + [ 1] 5 　核磁共振法 NMR 是 60 年代用水母发光蛋白测定巨肌肉细胞中的[ Ca ]I 。70 年代出现了两类方法 :双偶氮吸光染料法和钙选择性微 电极 　　核磁共振法是一种新的、非光学技术的[ Ca2 + ]I 的检测方 法[2 ] 。1982 年出现了荧光法 ;随后 ,荧光染料不断更新 ,各种方