胰岛分离与纯化技术手册.pdf

前 言 胰岛移植中，保证胰岛供体的数量和质量是胰岛 移植成功的关键；从事糖尿病研究的实验也常常需要 胰岛细胞。因此，早在 20 世纪 60 年代就已经开始了 小动物胰岛分离方法的探索，Hellerstrom 等曾直接 从有高血糖的肥胖小鼠分离胰岛用于检测酶活性，后 来用同样的方法分离正常小鼠、大鼠和豚鼠的胰岛。 由于胰岛散在分布于胰腺的外分泌组织中，并与周 围组织紧密连接，胰岛的分离过程实际上是将其从富 含消化酶的腺泡中分离出来。所以无论使用何种方法， 都会不可避免地引起胰腺外分泌部的破坏、释放的多 种酶影响胰岛的数量和质量。因此，胰岛分离是组织 细胞分离中最困难的，而提取胰岛的方法存在缺欠、 胰腺缺血时间过长、损伤和胰岛的纯化方法等，都是 影响胰岛得率的重要因素。其中消化胰腺提取胰岛的 过程被认为是至关重要的步骤。不仅各种动物的胰岛 分离方法不同，同一动物胚胎与成年的分离方法也不 同，稍有偏差就可能导致“颗粒无收”。 dongwp 1 写在前面的感谢 经过近两个月的工作，这本电子书终于可以和大家见面 了。电子书的完成离不开原帖中战友的精彩发言，特别是 dongwp战友的多次精彩解答，也离不开大家的支持。感谢！ 电子书制作：libiecao 战友 封面制作：libiecao 战友 零余（非 dxyer，友情赞助） 电子书整理：小小东方 电子书校对：dongwp 战友 图片提供： dongwp 战友 morgan1980 战友 abob_ren 战友 jinghuanlv 战友 yangjhdoctor 战友 clsun213 战友 knockout 战友 doctorshi 战友 lilianzhang 战友 AZAFIGHTING 战友 小小东方 2 目 录 一、大鼠、小鼠、胎鼠及成人胰岛分离纯化的基本步骤 4 大鼠胰岛细胞分离与纯化（小鼠与大鼠同）4 胎小鼠胰岛分离7 成人胰腺消化、胰岛分离方法7 人胎胰岛冷冻保存方法8 胰岛鉴定方法8 胰岛功能检测9 二、实例分析11 dongwp战友的胰岛单层细胞照片11 morgan1980战友的胰岛分离照片13 yangjhdoctor战友的胰岛分离照片16 clsun213战友的胰岛分离照片及解说19 战友的胰岛分离照片及点评20 knockout战友的胰岛分离照片及点评(1)21 knockout战友的胰岛分离照片及点评(2)23 knockout战友的胰岛分离照片及点评(3)26 knockout战友的胰岛分离照片及点评(4)28 knockout战友的胰岛分离照片及点评(5)31 doctorshi战友的胰岛分离照片及点评（1）32 doctorshi战友的胰岛分离照片及点评（2）36 lilianzhang战友的胰岛分离照片及点评39 AZAFIGHTING战友的胰岛分离照片41 三、 QA42 试剂的选择和配制42 关于胶原酶 42