N-端加flag标签增加P21 Cip1WAF1蛋白质稳定性.pdf

! 癌变 畸变 突变 论论 著著 3 月 N-terminal Flag Tag N- 端加 fiag 标签 0 i p l/ WA F l 增加P2lCipl/ WAFl Stabilizes P2l Protein 蛋白质稳定性 ! ， ， LU Feng-min LI Ya-juan ZHUANG Hui ( Dep artment of Microbiology , Peking Uniuersity Health Science Center , Beij ing 100083 , China) 鲁凤民 李雅娟 庄 辉/ / ! (北京大学医学部病原生物学系，北京 l00083) 【摘要】背景与目的：已知细胞分裂周期抑制因子 通过蛋白酶体通路降解，其氨基端的泛素化可能参与了这一过程。 为一 P2l Fiag 蛋白标签，常用于标记重组蛋白质，以便对靶蛋白进行生物学功能分析。本文旨在研究N- 端加fiag 对P2l 蛋白质稳定性的影响。 材料 与方法：建立稳定表达外源fiag-p2l 蛋白质的NIH3T3 细胞株，应用蛋白印迹法 (WB) 检测 NIH3T3 细胞表达的fiag-p2l，并比较其与内 源P2l 蛋白质半衰期的差异；确定阻断蛋白酶体水解通路对其降解过程的影响。 结果：NIH3T3 细胞表达的内源P2l 蛋白质半衰期约 ，而同一细胞表达的 融合蛋白半衰期则明显延长；用抑制剂 阻断蛋白酶体水解通路后， 蛋白质的量明显增 30 min fiag-p2l MG-l32 P2l 加，但同一细胞内表达的fiag-p2l量却无明显改变。 结论：N- 端加fiag 标签可增加P2l 蛋白质的稳定性。在对 P2l 蛋白质的生物学功 能进行研究时，应考虑 端加 对 泛素化 蛋白酶体依赖的降解过程的影响。 N- fiag P2l - 【关键词】P21C ip 1/ W A F 1 ；F 标签；蛋白酶体；降解 中图分类号：R73 文献标识码：A