基因工程的原理和技术.ppt

* * 第二节 基因工程的原理和技术 温故而知新 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 质粒——载体 基因工程操作的工具 剪切 拼接 导入 表达 （一）获得目的基因 （二）形成重组DNA分子 （三）将重组DNA分子导入受体细胞 （四）目的基因的检测和表达 基因工程的原理和技术 1、筛选含有目的基因的受体细胞 2、目的基因的表达 步骤一 获得目的基因 人工合成(反转录法) 利用PCR技术扩增 已知序列： 从基因文库获得 未知序列： ( DNA library ) 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) 氢键断裂，形成单链DNA。 引物与DNA模板结合，形成局部双链。 在酶的作用下，不断延伸，合成双链DNA。 多次循环，获得大量双链DNA分子。 PCR技术扩增 利用PCR技术扩增目的基因 目的基因的mRNA 逆转录 单链DNA 合成 双链DNA（目的基因） 蛋白质氨基酸序列 推测 mRNA的核苷酸序列 推测 结构基因的核苷酸序列 化学合成 目的基因 人工合成法 逆转录法 根据已知氨基酸序列直接合成DNA 鸟枪法：散弹射击法 供体细胞DNA 限制酶 许多DNA片段 载入 运载体 导入 受体细胞 扩增 产生特定性状 分离 目的基因 从基因文库获得 步骤二 形成重组DNA分子 可能存在情况：目的基因 载体 步骤三 将重组DNA分子导入受体细胞 1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 (三)将目的基因导入受体细胞 1.基因工程中常用的受体细胞有哪些？ 2.导入过程如何？ 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径 受体细胞：细菌 CaCl2 细胞壁的通透性增大 重组质粒进入受体细胞 目的基因随受体细胞的繁殖而复制 步骤四 筛选含有目的基因的受体 利用标记基因来筛选： 通过检测标记基因的有无，（或利用标记基因体现的性状）来判断目的基因是否导入受体细胞。 对目的基因进行分子水平的检测： 通过合成标准探针，利用DNA杂交技术来进行目的基因的检测。 DNA与DNA杂交，DNA与RNA杂家