丹参柯巴基焦磷酸合酶基因的优化表达、纯化及抗体制备.pdf

·766· PharmaceuticaSinica 药学学报Acta 2008，43(7)：766—772 丹参柯巴基焦磷酸合酶基因的优化表达、纯化及抗体制备 高 伟1，崔光红1，孔建强2，程克棣2，王伟2，袁 媛1，黄璐琦h (1．中国中医科学院中药研究所，北京100700；2．中国医学科学院北京协和医学院药物研究所，北京100050) mihiorrhiza 摘要：用含丹参柯巴基焦磷酸合酶(Salvia eopalyldiphosphatesynthase，SmCPS)基因的重组质粒 达；对影响町溶性表达的4个因素，即诱导温度、IPTG诱导浓度、诱导时宿主菌的密度(A㈣)和诱导时间进行了优化。 mmol·L～IPTG，在20℃诱导培养8h表达的日T溶性蛋白量最高，约占 结果发现在宿主菌A鲫达到1．0时加入0．4 细胞总蛋白的35．6％。用Ni2+亲和色谱法纯化表达产物，纯化蛋白产率达到12．3mg·L～。将纯化蛋白免疫制备 兔源SmCPS抗血清，ELISA测定效价为1：24300，且经Westernbh)tting鉴定该抗体可特异性识别SmCPS抗原，获得 了效价高、免疫反应性好的SmCPS多克隆抗体，为进一步从蛋白水平研究SmCPS表达与丹参酮类有效成分生物合 成相关性提供了物质基础。 关键词：丹参；柯巴基焦磷酸合酶；优化表达；抗体制备 中图分类号：R915 文献标识码：A 文章编号：0513-4870(2008)07一0766—07 and ofrecombinant purification Optimizingexpression SaMamiltiorrhiza inE．coli copalyldiphosphatesynthaseprotein and ofrabbitantiserumSmCPS preparation against GAOWei 1，CUIGuang．hon91，KONGJian．qian92，CHENGKe-di2， WANG Wei2，YUANYuanl，HUANG Lu．qil+ ChineseMateria Medical (J．Instituteof Medica，ChineseAcademy∥ChineseScience，8eijing100700，China； 2．Institute Medica．Chinese Scienceand UnionMedical 100050，China) ofMateria AcademyofMedical Peking College，Belling Abstract：The SmCPSwastransformedintoE．coli plasmidpET32CPSharboringgene expression BL2l inrecombinantstrain inductionofE．coli trxB(DE3)resulting E．∞如[pET32CPS]．The different concentrationsand valuesofE．coli